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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 同样的PCR产物，琼脂糖凝胶电泳时而有带时而没带，但marker每次都清晰
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ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-02-20 16:43:54
很可能是点样问题。

应该不是...
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11楼2014-02-20 19:31:13
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朱小坏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
或者是样留在孔里没跑出去，或者胶太厚，缓冲液用久了，太热了。。。
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12楼2014-02-20 19:34:52
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小套套李

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ice清玉 at 2014-02-20 13:52:36
我们实验室称量多少琼脂糖，加多少染料都写得清清楚楚贴在墙上的...TAT...一开始我也觉得是我配胶的问题，可是marker都很清晰啊...我也觉着诡异啊...难道就这样碰运气才能碰上哪次有条带我才能回收吗...太悲催了吧 ...

你们实验室琼脂糖 和染料 加多少呢？
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13楼2014-02-20 21:05:03
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by ice清玉 at 2014-02-20 19:30:06
5ul 啊...降解也不可能全降解啊...有一次P完后接着跑电泳没有带，在冰箱放了两天后又跑了一次竟然出带了......

1、点样有问题，可以在点样前混匀一下
2、胶没问题的话，请确定你染色也没有问题
3、一般PCR产物都是全点，因为有的条带是很弱的，量不足看不出结果
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
14楼2014-02-20 21:40:39
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winner00lk

铜虫 (小有名气)
建议你跑完PCR离心后再点样
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我从远方来，没带走一丝遗憾
15楼2014-02-21 14:30:11
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RNAPROTEIN

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ice清玉(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:53:47
有可能是放冰箱之后酶继续催化PCR 反应，如果是你PCR反应的循环次数不够的话，那么P完之后很可能因为copy数少而不能用肉眼看到条带，放冰箱一段时间之后酶可能会继续催化反应（反应应该很慢，但由于PCR是成指数增长，所以哪怕是增加了2-3个反应，你的产物的copy数都会成指数增加），导致你再次跑胶时能看到条带。这纯属个人设想，仅供参考。
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16楼2014-02-22 14:09:19
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永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物的问题，引物的稀释所用的水不同会出现这种情况，水必须达到要求，合格的灭菌双蒸水，不然这种情况会经常出现。
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17楼2014-02-23 10:57:12
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

说说你的细节吧。

胶怎么制备的？
EB怎么用的？是加在胶里还是后染色？
电泳条件确定一样吗？
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18楼2014-02-23 16:27:28
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

头一次诡异可能是胶没回收干净，后一次可能是dna降解了
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有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
19楼2014-04-04 14:16:51
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