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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 同样的PCR产物，琼脂糖凝胶电泳时而有带时而没带，但marker每次都清晰
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ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 同样的PCR产物，琼脂糖凝胶电泳时而有带时而没带，但marker每次都清晰 已有10人参与

做3' 端race，PCR产物跑胶没有带，在冰箱4℃放了一天，第二天随手又跑了一次胶，竟然有带了，两次跑胶marker都很清晰。我以为这只是一个巧合，后来这种事情竟然发生了多次！头天做了PCR跑胶检测后有条带，放冰箱第二天再检测又没有带了！同样的，两次marker都清晰。还有一次，5' 端race，PCR之后检测没有条带，我死马当活马医依然跑胶准备回收，条带竟然又出来了，还很清晰....之前一直以为是PCR有问题，现在想想应该是胶有问题吧...可是问题在哪儿呢...TAT
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1楼 2014-02-20 13:37:55
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RNAPROTEIN

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ice清玉(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:53:47
有可能是放冰箱之后酶继续催化PCR 反应，如果是你PCR反应的循环次数不够的话，那么P完之后很可能因为copy数少而不能用肉眼看到条带，放冰箱一段时间之后酶可能会继续催化反应（反应应该很慢，但由于PCR是成指数增长，所以哪怕是增加了2-3个反应，你的产物的copy数都会成指数增加），导致你再次跑胶时能看到条带。这纯属个人设想，仅供参考。
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16楼2014-02-22 14:09:19
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2014-02-20 13:45:29
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ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-02-20 13:45:29
这么诡异，头回听说，肯定是你第一次跑胶时某些部分出问题了 ，比如配胶，染料等，你比对一下就知道了

我们实验室称量多少琼脂糖，加多少染料都写得清清楚楚贴在墙上的...TAT...一开始我也觉得是我配胶的问题，可是marker都很清晰啊...我也觉着诡异啊...难道就这样碰运气才能碰上哪次有条带我才能回收吗...太悲催了吧...
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3楼2014-02-20 13:52:36
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
难道你的EB分布不匀导致的，好可怕
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多情总被无情扰。。。愁
4楼2014-02-20 14:26:36
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