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ice清玉

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1.8
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在线: 4.6小时
虫号: 1865213
注册: 2012-06-20
专业: 发育生物学

[求助] 同样的PCR产物，琼脂糖凝胶电泳时而有带时而没带，但marker每次都清晰已有10人参与

做3' 端race，PCR产物跑胶没有带，在冰箱4℃放了一天，第二天随手又跑了一次胶，竟然有带了，两次跑胶marker都很清晰。我以为这只是一个巧合，后来这种事情竟然发生了多次！头天做了PCR跑胶检测后有条带，放冰箱第二天再检测又没有带了！同样的，两次marker都清晰。还有一次，5' 端race，PCR之后检测没有条带，我死马当活马医依然跑胶准备回收，条带竟然又出来了，还很清晰....之前一直以为是PCR有问题，现在想想应该是胶有问题吧...可是问题在哪儿呢...TAT

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1楼 2014-02-20 13:37:55

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RNAPROTEIN

银虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 682.3
帖子: 51
在线: 11.7小时
虫号: 1940341
注册: 2012-08-15
专业: 心肌细胞/血管细胞损伤、修

【答案】应助回帖

★ ★
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ice清玉(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:53:47

有可能是放冰箱之后酶继续催化PCR 反应，如果是你PCR反应的循环次数不够的话，那么P完之后很可能因为copy数少而不能用肉眼看到条带，放冰箱一段时间之后酶可能会继续催化反应（反应应该很慢，但由于PCR是成指数增长，所以哪怕是增加了2-3个反应，你的产物的copy数都会成指数增加），导致你再次跑胶时能看到条带。这纯属个人设想，仅供参考。