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ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 同样的PCR产物,琼脂糖凝胶电泳时而有带时而没带,但marker每次都清晰 已有10人参与

做3' 端race,PCR产物跑胶没有带,在冰箱4℃放了一天,第二天随手又跑了一次胶,竟然有带了,两次跑胶marker都很清晰。我以为这只是一个巧合,后来这种事情竟然发生了多次!头天做了PCR跑胶检测后有条带,放冰箱第二天再检测又没有带了!同样的,两次marker都清晰。还有一次,5' 端race,PCR之后检测没有条带,我死马当活马医依然跑胶准备回收,条带竟然又出来了,还很清晰....之前一直以为是PCR有问题,现在想想应该是胶有问题吧...可是问题在哪儿呢...TAT
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ice清玉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-20 19:21:29
你PCR结束之后点了多少跑电泳?你切胶回收一定是全点的,很有可能你检测点的量太小了,才看不到条带。另外,放冰箱之后会降解的

5ul 啊...降解也不可能全降解啊...有一次P完后接着跑电泳没有带,在冰箱放了两天后又跑了一次竟然出带了...
10楼2014-02-20 19:30:06
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查看全部 19 个回答

yyshpy007

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

2楼2014-02-20 13:45:29
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ice清玉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-02-20 13:45:29
这么诡异,头回听说,肯定是你第一次跑胶时某些部分出问题了 ,比如配胶,染料等,你比对一下就知道了

我们实验室称量多少琼脂糖,加多少染料都写得清清楚楚贴在墙上的...TAT...一开始我也觉得是我配胶的问题,可是marker都很清晰啊...我也觉着诡异啊...难道就这样碰运气才能碰上哪次有条带我才能回收吗...太悲催了吧...
3楼2014-02-20 13:52:36
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
难道你的EB分布不匀导致的,好可怕
多情总被无情扰。。。愁
4楼2014-02-20 14:26:36
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