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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR后琼脂糖凝胶电泳条带不直
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赵景楠1991

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR后琼脂糖凝胶电泳条带不直

我提取的是真菌DNA，在没有P之前，条带还算直的，但P后条带就花了，这是怎么回事？
PCR后琼脂糖凝胶电泳条带不直
PCR前的图片


PCR后琼脂糖凝胶电泳条带不直-1
PCR后的图片
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1楼 2013-10-31 08:44:35
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回帖置顶 ( 共有2个 )

踏雪314

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1 2013-11-20 10:03:31
这个……是不是溶胶的问题啊，看着Marker也不怎么直的说……
溶胶的时候好好看看，确定没有小颗粒了才行……
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2楼2013-10-31 11:53:45
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cccooo000

禁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 2013-11-20 10:04:47
可能是上样不均匀，混匀loading buffer。另外，你的上样量好像有点大。
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10楼2013-11-01 16:38:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 赵景楠1991 at 2013-10-31 18:33:14
那怎么解决这个问题呢？...

上面的样品有明显蛋白杂质，提取时用酚/氯仿多抽提。盐可以沉淀DNA样品后用70%乙醇洗。洗涤时尽量把沉淀重悬起来。
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6楼2013-10-31 23:15:50
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libhlk

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+3, 谢谢参与 2013-11-20 10:06:24
连maker都没跑直，就说明电压不稳或电泳液有问题了，可以换电泳液再跑看看，当然也有可能你的胶做的就不好哦
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7楼2013-11-01 11:12:43
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libhlk

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-11-20 10:05:10
引用回帖:
9楼: Originally posted by 赵景楠1991 at 2013-11-01 14:13:05
电压稳定的120V，电泳液全是新的，胶也溶的没问题...

按理说，如果maker跑出来都不正常，应该是这几个问题之一，你可以再单独跑一次maker再说，看看条带如何再找问题。
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11楼2013-11-01 21:04:15
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赵景楠1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 踏雪314 at 2013-10-31 11:53:45
这个……是不是溶胶的问题啊，看着Marker也不怎么直的说……
溶胶的时候好好看看，确定没有小颗粒了才行……

确实没有小颗粒了，而且看着没有小颗粒了，我都多热一遍的。
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3楼2013-10-31 12:21:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品杂质太多，盐浓度高。
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4楼2013-10-31 13:55:02
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赵景楠1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-31 13:55:02
样品杂质太多，盐浓度高。

那怎么解决这个问题呢？
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5楼2013-10-31 18:33:14
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赵景楠1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-31 23:15:50
上面的样品有明显蛋白杂质，提取时用酚/氯仿多抽提。盐可以沉淀DNA样品后用70%乙醇洗。洗涤时尽量把沉淀重悬起来。...

都融在PE buffer里面了，之前都用酒精洗过两回的，沉淀都悬起来了。
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8楼2013-11-01 14:11:43
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赵景楠1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by libhlk at 2013-11-01 11:12:43
连maker都没跑直，就说明电压不稳或电泳液有问题了，可以换电泳液再跑看看，当然也有可能你的胶做的就不好哦

电压稳定的120V，电泳液全是新的，胶也溶的没问题
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9楼2013-11-01 14:13:05
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