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ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 同样的PCR产物,琼脂糖凝胶电泳时而有带时而没带,但marker每次都清晰 已有10人参与

做3' 端race,PCR产物跑胶没有带,在冰箱4℃放了一天,第二天随手又跑了一次胶,竟然有带了,两次跑胶marker都很清晰。我以为这只是一个巧合,后来这种事情竟然发生了多次!头天做了PCR跑胶检测后有条带,放冰箱第二天再检测又没有带了!同样的,两次marker都清晰。还有一次,5' 端race,PCR之后检测没有条带,我死马当活马医依然跑胶准备回收,条带竟然又出来了,还很清晰....之前一直以为是PCR有问题,现在想想应该是胶有问题吧...可是问题在哪儿呢...TAT
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ice清玉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-02-20 15:33:17
如果不是你亲自配胶的话,还是确定一下是不是哪些材料有问题,或者EB最好在胶半冷却后加,沸腾时容易挥发...

染料没问题啊...配胶配了两三年了都没问题不可能突然就有问题了啊...TAT...我刚才又跑了一次,跑了一个别人的样,别人的样有带,我的没带...我几乎可以确定是我的PCR产物有问题了...可是我就是不明白为什么有时候有带,有时候没带呢...
6楼2014-02-20 16:14:23
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查看全部 19 个回答

yyshpy007

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

2楼2014-02-20 13:45:29
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ice清玉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-02-20 13:45:29
这么诡异,头回听说,肯定是你第一次跑胶时某些部分出问题了 ,比如配胶,染料等,你比对一下就知道了

我们实验室称量多少琼脂糖,加多少染料都写得清清楚楚贴在墙上的...TAT...一开始我也觉得是我配胶的问题,可是marker都很清晰啊...我也觉着诡异啊...难道就这样碰运气才能碰上哪次有条带我才能回收吗...太悲催了吧...
3楼2014-02-20 13:52:36
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
难道你的EB分布不匀导致的,好可怕
多情总被无情扰。。。愁
4楼2014-02-20 14:26:36
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