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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » ＰＣＲ产物跑电泳，随着跑电泳时间的增加，，条带会下移，最后竟然消失了，怎么回事呀
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韩元富豪

金虫 (小有名气)

[求助] ＰＣＲ产物跑电泳，随着跑电泳时间的增加，，条带会下移，最后竟然消失了，怎么回事呀 已有15人参与

做了很久的PCR，一直是引物二聚体，昨天变化了PCR程序，没有引物二聚体了，出现了单一的目的条带，但发现，随着跑电泳时间的增加，，条带会下移，刚开始很亮，然后于是直接纯化，跑电泳， 竟然什么也没有，今天又做了一次，重新配了胶，又做了一次ＰＣＲ，还是出现了单一条带，特地每隔１０分钟用成像仪看一下，结果还是做天那样，随着时间的增加，条带会下移，最后都消失了，把PCR产物也纯化了，跑电泳还是什么都没有，怎么回事啊，该怎么办（模板ＤＮＡ又跑了一遍，没有降解）
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1楼 2014-05-11 21:13:05
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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韩元富豪(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-12 10:44:45
染料跑出去了当然看不到啦

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4楼2014-05-11 23:00:07
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zuolihui001

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
韩元富豪(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-12 10:44:55
条带跑得时间太长，跑到胶外面去了吧！

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2楼2014-05-11 21:17:56
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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韩元富豪(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-12 10:45:03
不知道LZ是怎么定义胶中"上下左右"的
如果你说的"下移"是沿电流方向的移动 那么这是完全正常的现象
时间越长条带跑得越远嘛
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3楼2014-05-11 22:50:35
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daxulalala

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
韩元富豪(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-12 10:45:11
你用的什么染料啊，是EB吗？加到胶里的还是跑完染色啊？
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5楼2014-05-12 00:09:22
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韩元富豪

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zuolihui001 at 2014-05-11 21:17:56
条带跑得时间太长，跑到胶外面去了吧！

那这单一的条带是不是我的目的条带呢？一般ＰＣＲ产物跑电泳，电压，时间大概怎么确定，我的l两个PCR产物是281bp和350bp
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6楼2014-05-12 08:49:08
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韩元富豪

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-11 23:00:07
染料跑出去了当然看不到啦

那这单一的条带是不是我的目的条带呢？一般ＰＣＲ产物跑电泳，电压，时间大概怎么确定，我的l两个PCR产物是281bp和350bp
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7楼2014-05-12 08:50:38
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韩元富豪

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by daxulalala at 2014-05-12 00:09:22
你用的什么染料啊，是EB吗？加到胶里的还是跑完染色啊？

不是EB，是glostine，是胶溶化后加到胶了的，我都不知道现在的条带是不是我想要的了，位置一直在变，纯化后，跑电泳什么也没有
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8楼2014-05-12 08:52:58
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shucanwei

木虫 (正式写手)
有图吗？
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
9楼2014-05-12 09:07:43
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韩元富豪

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by shucanwei at 2014-05-12 09:07:43
有图吗？

没有，那个成像仪不带照相功能，就是ＰＣＲ条件优化的时候，一直是只有引物二聚体，而且都很亮，前天条件优化了，终于没有了，只有单一的条带，应该不是引物二聚体，跑２０分钟，就在我的应该出现目的条带的位置，和ｍａｒｋｅｒ对比的，在跑１０分钟，在看，条带就下移了，再跑１０　分钟，条带就没有了，因为只有单一条带，就直接纯化了，没有切胶回收，跑电泳后，什么也没有
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10楼2014-05-12 09:25:22
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