应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物直接双酶切后电泳看不到条带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
311/1返回列表
查看: 7464  |  回复: 30
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[交流] PCR产物直接双酶切后电泳看不到条带

做完PCR后直接双酶切，然后跑电泳，但是看不到条带，这是什么原因啊？！是因为浓度不够？但是我PCR后跑电泳条带还是挺亮的
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-03-23 08:55:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: MolEPI+1, 向你学习 2013-06-28 12:15:50
可能原因：
1.PCR的电泳的亮带可能是假阳性的非特异性扩增带，不放心就测序确认一下；
2.做酶切时的DNA浓度太低，所以需要用超滤离心浓缩一下看看；
3.PCR的电泳的亮带可能是特异性扩增带，但是从胶中回收目的DNA太少；
4.目的DNA酶切之间已经被降解；
5.酶切目的DNA的限制性内切酶失活，或受到抑制，换别的酶在尝试。
赞一下(1人) 回复此楼
30楼2013-06-28 02:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
酶切前取少量pcr产物跑电泳了吗？酶切后点样时确实看着样液沉在胶孔里而不是飘出来了吗？无图无真相。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-23 10:39:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
如果你PCR完后跑电泳很亮，直接双酶切怎么可能会没有条带？你该不会是点错了吧？双酶切后对条带大小也没有影响，repeat again
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-23 11:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzzaazzzzz

新虫 (初入文坛)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
是一直都这样，还是就这次刚做出现的，重复一下，这样的结果是不对的
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-23 16:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 天使托 at 2013-03-23 11:21:40
如果你PCR完后跑电泳很亮，直接双酶切怎么可能会没有条带？你该不会是点错了吧？双酶切后对条带大小也没有影响，repeat again

不会点错啊，已经做了好几遍了，都是一样的结果啊
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-23 16:33:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zzzaazzzzz at 2013-03-23 16:10:03
是一直都这样，还是就这次刚做出现的，重复一下，这样的结果是不对的

做了好几次了，之前也一直是看不到条带，按着我目的条带的大小直接切胶回收再继续往下做，有做出过结果，但是最近做不出来了
赞一下 回复此楼
8楼2013-03-23 16:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-03-23 10:39:08
酶切前取少量pcr产物跑电泳了吗？酶切后点样时确实看着样液沉在胶孔里而不是飘出来了吗？无图无真相。

酶切前没跑电泳了，点样也没问题，我想知道的是一般PCR产物直接酶切的话要多大的量比较合适啊
赞一下 回复此楼
9楼2013-03-23 16:36:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-03-23 16:33:33
不会点错啊，已经做了好几遍了，都是一样的结果啊...

当然也有可能是你酶切体系的缘故，体系中有可能DNA量太少了，给稀释了；也有可能是降解了.....
赞一下 回复此楼
10楼2013-03-23 17:04:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-03-23 16:36:13
酶切前没跑电泳了，点样也没问题，我想知道的是一般PCR产物直接酶切的话要多大的量比较合适啊...

把握比较大的时候可以不跑电泳。但一旦出问题你就找不到原因了。
所以实验还是做全套吧。PCR产物是回收后酶切还是直接在pcr反应液中酶切？回收后就几百到一千微克每20uL体系吧。
赞一下 回复此楼
11楼2013-03-23 19:32:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 天使托 at 2013-03-23 17:04:25
当然也有可能是你酶切体系的缘故，体系中有可能DNA量太少了，给稀释了；也有可能是降解了........

之前做别的目的片段的时候酶切后可以看到条带的，但是我回收PCR产物时是同时做了4管的PCR，4管的PCR产物一起回收的
赞一下 回复此楼
12楼2013-03-23 19:38:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-03-23 19:32:09
把握比较大的时候可以不跑电泳。但一旦出问题你就找不到原因了。
所以实验还是做全套吧。PCR产物是回收后酶切还是直接在pcr反应液中酶切？回收后就几百到一千微克每20uL体系吧。...

是PCR产物回收以后再做的酶切，而且是4管PCR产物一起回收的，这样的话DNA含量应该不会很低吧
赞一下 回复此楼
13楼2013-03-23 19:39:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hesibonnie

新虫 (初入文坛)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
PCR产物不用回收，就可以直接酶切吗？
赞一下 回复此楼
15楼2013-03-23 22:57:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

好想懂

银虫 (小有名气)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
跑的时间是不是太久了，跑出去了
赞一下 回复此楼
16楼2013-03-24 07:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 好想懂 at 2013-03-24 07:19:59
跑的时间是不是太久了，跑出去了

应该不会啊，Marker所有的条带都在胶上呢啊
赞一下 回复此楼
17楼2013-03-24 08:47:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by hesibonnie at 2013-03-23 22:57:10
PCR产物不用回收，就可以直接酶切吗？

回收了啊，回收以后再做酶切再回收然后连接
赞一下 回复此楼
18楼2013-03-24 08:48:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-03-23 19:39:37
是PCR产物回收以后再做的酶切，而且是4管PCR产物一起回收的，这样的话DNA含量应该不会很低吧...

所以说，最可能就是PCR根本就没有得到产物，然后就是回收的时候弄丢了。lz赶紧补两个电泳检测呀！
赞一下 回复此楼
20楼2013-03-24 13:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quxixing

金虫 (正式写手)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
有可能污染吗？或者搞个有图有真相！
赞一下 回复此楼
21楼2013-03-24 14:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主pcr以后是切胶回收的还是过柱回收的？如果是切胶回收的PCR产物亮度如何？如果是过柱回收的，做酶切之前最好跑胶确定下亮度等等，每一步都做好了，才能保证结果。好运
赞一下 回复此楼
22楼2013-03-24 18:47:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-03-24 13:59:29
所以说，最可能就是PCR根本就没有得到产物，然后就是回收的时候弄丢了。lz赶紧补两个电泳检测呀！...

怎么检测啊？拿回收以后的PCR产物跑电泳吗？
赞一下 回复此楼
23楼2013-03-24 18:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by dhmdddd at 2013-03-24 18:47:21
楼主pcr以后是切胶回收的还是过柱回收的？如果是切胶回收的PCR产物亮度如何？如果是过柱回收的，做酶切之前最好跑胶确定下亮度等等，每一步都做好了，才能保证结果。好运

是切胶回收的，这是PCR产物电泳图，条带貌似不是特别亮而且还有非特异性条带

chuan.png
赞一下 回复此楼
24楼2013-03-24 18:53:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
23楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-03-24 18:48:16
怎么检测啊？拿回收以后的PCR产物跑电泳吗？...

PCR完毕，取2uL电泳，其余加入等体积0.5M氯化钠后氯仿异戊醇抽提蛋白，乙醇沉淀回收DNA。回收后，取2uL电泳，其余酶切。
赞一下 回复此楼
25楼2013-03-24 23:43:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shucanwei

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
DNA加多点，加到1ug，用浓点的胶跑
赞一下 回复此楼
26楼2013-03-25 00:47:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
24楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-03-24 18:53:24
是切胶回收的，这是PCR产物电泳图，条带貌似不是特别亮而且还有非特异性条带

chuan.png
...

是不是引物的特异性不够好?目的条带还好吧,应该可以回收到.你切胶回收的PCR产物酶切前重新跑胶验证,看条带是否单一,也看下亮度如何.
赞一下 回复此楼
27楼2013-03-25 20:04:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haitian0625

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以PCR产物电泳回收；若是没非特异，也可沉淀PCR产物再去酶切。
赞一下 回复此楼
28楼2013-03-25 21:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oliver501

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 天使托 at 2013-03-23 17:04:25
当然也有可能是你酶切体系的缘故，体系中有可能DNA量太少了，给稀释了；也有可能是降解了........

那至少原条带应该会出现吧
赞一下 回复此楼
29楼2013-06-27 22:06:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
fyz72322楼
2013-03-23 09:53   回复  
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
haixiawu6楼
2013-03-23 16:16   回复  
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
licong952714楼
2013-03-23 19:43   回复  
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
yingying158819楼
2013-03-24 09:53   回复  
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
ytflark31楼
2020-08-27 18:07   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 飘零的叶子 的主题更新
311/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +8 zyx上岸！ 2026-04-05 8/400 2026-04-05 12:21 by 无际的草原
[考研] 070300化学求调剂 +17 小黄鸭宝 2026-03-30 17/850 2026-04-05 12:03 by 宁馨哈哈
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +6 ioodiiij 2026-04-04 6/300 2026-04-05 10:09 by guoweigw
[考研] 286求调剂 +3 草木不言 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:40 by lbsjt
[考研] 085400电子信息319求调剂（接受跨专业调剂） +5 星星不眨眼喽 2026-04-03 6/300 2026-04-04 21:50 by hemengdong
[考研] 296材料专硕求调剂 +21 202451007219 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 21:48 by hemengdong
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-03 12/600 2026-04-04 21:46 by hemengdong
[考研] 340求调剂 +4 jhx777 2026-03-29 4/200 2026-04-04 20:08 by 无际的草原
[考研] 求生物学专业调剂-332分 +5 云朵遛弯指南 2026-04-04 5/250 2026-04-04 10:05 by rzh123456
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
[考研] 070300一志愿211，312分求调剂院校 +16 小黄鸭宝 2026-03-30 16/800 2026-04-03 19:53 by lijunpoly
[考研] 11408，284分，二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 求调剂！生物与医药专硕 +4 逆转陆先生 2026-04-01 5/250 2026-04-03 08:33 by Jaylen.
[考研] 312求调剂 +4 赊月色 2026-04-02 5/250 2026-04-03 08:21 by fangshan711
[考研] 一志愿大工学硕，求调剂 +4 yub0811 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:36 by 百灵童888
[考研] 一志愿北京科技材料科学与工程288分，求调剂 +14 是辰啊 2026-04-02 14/700 2026-04-02 21:10 by dongzh2009
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 372求调剂 +3 jj涌77 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:57 by olim
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭