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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物直接双酶切后电泳看不到条带
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[交流] PCR产物直接双酶切后电泳看不到条带

做完PCR后直接双酶切，然后跑电泳，但是看不到条带，这是什么原因啊？！是因为浓度不够？但是我PCR后跑电泳条带还是挺亮的
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1楼 2013-03-23 08:55:22
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: MolEPI+1, 向你学习 2013-06-28 12:15:50
可能原因：
1.PCR的电泳的亮带可能是假阳性的非特异性扩增带，不放心就测序确认一下；
2.做酶切时的DNA浓度太低，所以需要用超滤离心浓缩一下看看；
3.PCR的电泳的亮带可能是特异性扩增带，但是从胶中回收目的DNA太少；
4.目的DNA酶切之间已经被降解；
5.酶切目的DNA的限制性内切酶失活，或受到抑制，换别的酶在尝试。
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30楼2013-06-28 02:54:37
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
酶切前取少量pcr产物跑电泳了吗？酶切后点样时确实看着样液沉在胶孔里而不是飘出来了吗？无图无真相。
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3楼2013-03-23 10:39:08
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
如果你PCR完后跑电泳很亮，直接双酶切怎么可能会没有条带？你该不会是点错了吧？双酶切后对条带大小也没有影响，repeat again
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4楼2013-03-23 11:21:40
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zzzaazzzzz

新虫 (初入文坛)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
是一直都这样，还是就这次刚做出现的，重复一下，这样的结果是不对的
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5楼2013-03-23 16:10:03
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