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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物酶切后电泳跑成这样 费解啊！！！
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

[求助] pcr产物酶切后电泳跑成这样 费解啊！！！ 已有1人参与

pcr产物直接酶切（PdmI），然后用1XTBE缓冲液，3%琼脂糖凝胶电泳60V跑了一个小时，结果出先了诡异的条带，酶切部分条带变成了弧形，特别是和ladder接着的地方，为了排除其他影响，特意点了很多ladder，发现ladder都没问题，郁闷啊，求各位大侠给看看怎么回事啊！！！

12.18.JPG
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不将就
1楼 2012-12-19 11:22:21
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

望海思月

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
忘忧草_: 金币+2, ★有帮助 2012-12-19 18:52:15
应该是制胶的问题，胶不均匀就会出现这种现象的
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5楼2012-12-19 16:23:52
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普通回帖

忘忧草_

木虫 (正式写手)
顶！！！！！！！！！！！1
2楼2012-12-19 11:24:00
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
忘忧草_: 金币+2, ★有帮助 2012-12-19 11:55:16
MARKER有部分也歪了

产物没有问题，应该是你电泳条件不好。1，缓冲液没有把胶掩盖住；2，电极丝歪了；3，胶配的不好，冷却过头了
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3楼2012-12-19 11:35:20
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忘忧草_

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2012-12-19 11:35:20
MARKER有部分也歪了

产物没有问题，应该是你电泳条件不好。1，缓冲液没有把胶掩盖住；2，电极丝歪了；3，胶配的不好，冷却过头了

缓冲液都盖住了
电极丝不确定 我试了个电泳槽 也出现类似的情况 但是如果只跑pcr产物就没事 难道是酶切体系里面的一些物质在跑电泳时和胶发生了反应
而且这个图也只有酶切部分有问题 ladder都没问题啊
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不将就
4楼2012-12-19 11:57:37
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btx362237729

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
忘忧草_: 金币+2, ★有帮助 2012-12-19 18:53:56
我觉得很可能是电极丝歪了 哈哈
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人生最黑暗的时光终于过去了
6楼2012-12-19 16:29:03
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
忘忧草_: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-19 18:54:21
兩個可能性吧，一個是膠有問題，不均勻；另一個是你的樣品里有社麼讓樣品變的粘了？
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我会绕一个圈，走回到实验室
7楼2012-12-19 16:42:42
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zyy4581

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
忘忧草_: 金币+2, ★有帮助 2012-12-19 18:57:40
胶没做好的可能性较大吧！另外，杂带太多了，不知是不是引物的问题呢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2012-12-19 17:53:21
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忘忧草_

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by btx362237729 at 2012-12-19 16:29:03
我觉得很可能是电极丝歪了 哈哈

这个我师弟换了TAE缓冲液 1%的胶 跑1000多的PCR片段没问题啊
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不将就
9楼2012-12-19 18:53:46
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忘忧草_

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-12-19 16:42:42
兩個可能性吧，一個是膠有問題，不均勻；另一個是你的樣品里有社麼讓樣品變的粘了？

我也猜测是不是酶切体系的问题 体系里面有什么让胶在电泳时发生了变化 我的酶切体系是
pcr产物5 ul
酶       1 ul
buffer  1 ul
水       3 ul
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不将就
10楼2012-12-19 18:56:21
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