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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr 产物在跑电泳时不出条带
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舟之行

铜虫 (正式写手)

[求助] pcr 产物在跑电泳时不出条带 已有6人参与

配制20 μL体系，mix、F、R、水依次加10μL*13、1μL*13、1μL*13、6μL*13于1.5mlEP管，分装成12管，每管在加入2μL  DNA
反应程序：
1、95℃    5min；
2、95℃   30s；
   50-63℃   30s；
72℃  30s；
3、Go to 2
34个循环
4、72℃ 5min；
5、4℃ 10min
6、end

总时间在2小时，但是结果发现ep底部体系变少，管盖上有水珠。
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仿制药一致性评价，多肽及核酸类药物分析及代谢物分析
1楼 2014-09-13 22:28:14
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xinqing617

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-14 12:29:29
盖子没盖好，蒸发掉一部分。pcr仪热盖的温度不够。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-13 22:31:15
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dxh86412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-14 12:29:33
PCR上的热盖没盖好
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3楼2014-09-13 22:52:15
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wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
舟之行(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-14 09:20:58
这个问题，首先你要确定一下顶格温度，是否是105度。有一些PCR是需要单独设置的。有时候别人30度链接，你在接着PCR可能会出现这个问题。再就是MIX有时候不太稳定，你要是反复冻融容易扩不出来。建议你换成TAQ酶试试。
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4楼2014-09-14 00:13:36
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kuenyunliu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-09-22 16:40:31
这都不是主要问题。
1. 你的target片段多大？
2. 你的模板质量如何？
3. 引物设计如何？
4. 考虑使用touch-down没？
5. 片段是否高GC？
6. 考虑使用过别的聚合酶没？
从这几个方面排除原因  pcr一般都不是问题
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-18 21:28:49
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舟之行

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xinqing617 at 2014-09-13 22:31:15
盖子没盖好，蒸发掉一部分。pcr仪热盖的温度不够。

是热盖的问题
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仿制药一致性评价，多肽及核酸类药物分析及代谢物分析
6楼2014-09-20 20:21:44
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小傻瓜@静子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-22 16:56:36
你的目的片段有多大，CG的含量如何，引物设计是否得当，这些决定你的PCR条件，条件合适才能P出目的片段，电泳时才会显示有条带
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7楼2014-09-22 14:52:37
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

加点甘油封液试下！
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有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
8楼2014-09-22 15:41:42
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舟之行

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by kuenyunliu at 2014-09-18 21:28:49
这都不是主要问题。
1. 你的target片段多大？
2. 你的模板质量如何？
3. 引物设计如何？
4. 考虑使用touch-down没？
5. 片段是否高GC？
6. 考虑使用过别的聚合酶没？
从这几个方面排除原因  pcr一般都不是问 ...

9楼2015-01-18 19:31:28
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