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舟之行

铜虫 (正式写手)

[求助] pcr 产物在跑电泳时不出条带已有6人参与

配制20 μL体系,mix、F、R、水依次加10μL*13、1μL*13、1μL*13、6μL*13于1.5mlEP管,分装成12管,每管在加入2μL  DNA
反应程序:
1、95℃    5min;
2、95℃   30s;
   50-63℃   30s;
72℃  30s;
3、Go to 2
34个循环
4、72℃ 5min;
5、4℃ 10min
6、end

总时间在2小时,但是结果发现ep底部体系变少,管盖上有水珠。
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仿制药一致性评价,多肽及核酸类药物分析及代谢物分析
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xinqing617

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-14 12:29:29
盖子没盖好,蒸发掉一部分。pcr仪热盖的温度不够。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-09-13 22:31:15
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dxh86412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-14 12:29:33
PCR上的热盖没盖好
3楼2014-09-13 22:52:15
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wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
舟之行(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-14 09:20:58
这个问题,首先你要确定一下顶格温度,是否是105度。有一些PCR是需要单独设置的。有时候别人30度链接,你在接着PCR可能会出现这个问题。再就是MIX有时候不太稳定,你要是反复冻融容易扩不出来。建议你换成TAQ酶试试。
4楼2014-09-14 00:13:36
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kuenyunliu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-09-22 16:40:31
这都不是主要问题。
1. 你的target片段多大?
2. 你的模板质量如何?
3. 引物设计如何?
4. 考虑使用touch-down没?
5. 片段是否高GC?
6. 考虑使用过别的聚合酶没?
从这几个方面排除原因  pcr一般都不是问题
5楼2014-09-18 21:28:49
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舟之行

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xinqing617 at 2014-09-13 22:31:15
盖子没盖好,蒸发掉一部分。pcr仪热盖的温度不够。

是热盖的问题
仿制药一致性评价,多肽及核酸类药物分析及代谢物分析
6楼2014-09-20 20:21:44
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小傻瓜@静子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-22 16:56:36
你的目的片段有多大,CG的含量如何,引物设计是否得当,这些决定你的PCR条件,条件合适才能P出目的片段,电泳时才会显示有条带
7楼2014-09-22 14:52:37
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

加点甘油封液试下!
有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
8楼2014-09-22 15:41:42
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舟之行

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by kuenyunliu at 2014-09-18 21:28:49
这都不是主要问题。
1. 你的target片段多大?
2. 你的模板质量如何?
3. 引物设计如何?
4. 考虑使用touch-down没?
5. 片段是否高GC?
6. 考虑使用过别的聚合酶没?
从这几个方面排除原因  pcr一般都不是问 ...

9楼2015-01-18 19:31:28
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