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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我用非变性聚丙酰胺跑pcr产物，跑不出多态性
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BBMXM

新虫 (初入文坛)

[求助] 我用非变性聚丙酰胺跑pcr产物，跑不出多态性 已有7人参与

我跑的pcr产物跑大板，跑出都是一条带，帮分析一下，我要的目的是两条带或三条，找多态性，下面是跑的图片，跑了好多都是单一条带，但是测序结果显示是有多态性的，帮帮分析一下

我用非变性聚丙酰胺跑pcr产物，跑不出多态性
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1楼 2014-03-21 09:47:41
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yuanyuanlg01

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-24 18:52:22
楼主可以尝试一下用14的胶跑，电压120V，我看你的胶图条带拖尾很严重。你是想在胶图上看到明显的PCR多态性是吗？那你多态性的测试用的什么方法，不同多态性之间大概的带电量和分子量差别怎样，我仔细看了一下胶图，你marker的尾端很干净，但是PCR产物的尾端对比起来明显有拖痕。我没做过PCR产物的多态性实验，不过从胶图上看，我觉得你可以改变一下实验条件使得多态性尽可能明显，并且做一对正负control。电压调低一些减少拖痕。希望有所帮助，多多交流。
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11楼2014-03-24 17:49:41
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是胶的分辨率不行啊？
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2楼2014-03-21 10:46:50
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yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶没制好，跑电泳时注意保持电流恒定
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3楼2014-03-21 10:52:28
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BBMXM

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-21 10:46:50
是不是胶的分辨率不行啊？

我用12%的丙烯酰胺凝胶，所有的试剂都是新配的
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4楼2014-03-21 13:09:12
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BBMXM

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yipan at 2014-03-21 10:52:28
胶没制好，跑电泳时注意保持电流恒定

我用的是电压是300v，5分钟，然后是120v的电压12个小时
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5楼2014-03-21 13:10:44
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BBMXM

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yipan at 2014-03-21 10:52:28
胶没制好，跑电泳时注意保持电流恒定

电压要保持在多少比较好啊，跑多长时间
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6楼2014-03-21 13:13:40
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yipan

铜虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by BBMXM at 2014-03-21 13:10:44
我用的是电压是300v，5分钟，然后是120v的电压12个小时...

不应该变换电压
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7楼2014-03-21 13:13:55
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by BBMXM at 2014-03-21 13:09:12
我用12%的丙烯酰胺凝胶，所有的试剂都是新配的...

你PCR产物多大？
多态性相差多大？
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8楼2014-03-21 16:03:38
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BBMXM

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-21 16:03:38
你PCR产物多大？
多态性相差多大？...

PCR产物大约220bp，A碱基变为G碱基
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9楼2014-03-24 11:10:02
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by BBMXM at 2014-03-24 11:10:02
PCR产物大约220bp，A碱基变为G碱基...

220nt，多态性还是碱基类型变了DNA长度没变化，12%的PAGE没有区别很正常。
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10楼2014-03-24 15:48:23
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