应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 单酶切跟双酶切电泳条带一样，且都比空质粒跑的快，什么原因？
81/1返回列表
查看: 12464  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小木可

铁虫 (初入文坛)

[求助] 单酶切跟双酶切电泳条带一样，且都比空质粒跑的快，什么原因？ 已有4人参与

用PBI121质粒进行SmaI和XbaI双酶切，跑电泳回收时，发现酶切片段跑的比空质粒快。然后我又分别用两种酶做单酶切，跑电泳，发现单酶切和双酶切跑的位置一样，而且都比空质粒跑的快，这是什么原因呢？我上大二，目前真心搞不明白，求大神指导。图中从左到右依次是：marker   空质粒   SmaI   XbaI   SmaI+XbaI

单酶切跟双酶切电泳条带一样，且都比空质粒跑的快，什么原因？
2014.10.5.HZK1..jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-05 22:43:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2014-10-06 12:35:25
小木可: 金币+1 2014-10-06 17:20:33
酶切后的质粒比环状质粒快，2个酶切位点太接近时，双酶切和单酶切看不出差别。
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-06 09:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青师大涛声

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-06 12:35:39
空质粒的片段大于酶切片段，所以要慢些。
赞一下 回复此楼
好好做实验。
3楼2014-10-06 10:06:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-06 12:35:53
小木可: 金币+1 2014-10-06 17:21:33
质粒分三型：闭环，开环，线性。大部分情况下，的确都是闭环跑得比线性快。但是，下列几个因素的结合，可以导致闭环比线性跑得慢：高浓度胶，高电压，胶中 EB 浓度正好合适。更多知识，可参考卢圣栋主编的“现代分子生物学实验技术”。
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-06 10:59:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小木可

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-10-06 09:28:57
酶切后的质粒比环状质粒快，2个酶切位点太接近时，双酶切和单酶切看不出差别。

是啊，单酶切跟双酶切看不出差别，可是酶切后的质粒成片段，比空质粒跑的还快，好神奇的感觉，后面的连接啥都不敢做了。
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-06 11:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a1353601094

新虫 (初入文坛)
为什么SmaI切的是2条带   SmaI与XbaI双切的只有1条带。。。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-10-06 16:44:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小木可

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by a1353601094 at 2014-10-06 16:44:32
为什么SmaI切的是2条带   SmaI与XbaI双切的只有1条带。。。

这个我当时也看到了，老师说是星号活性，我觉得根本就没什么关系，现在又重新按照要求，改进了体系，跑电泳看看。
赞一下 回复此楼
7楼2014-10-06 17:19:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

环状质粒由于特殊的共价闭合结构，不能按照一般的线性DNA观察电泳，环状闭合质粒比一般线性DNA跑的慢，线性质粒跑的快，提取质粒时纯化的好的话会出现两条带，有时会出现三条带，均属于正常情况。酶切后，质粒被打开，变成线性双链DNA，自然会跑的较快，之所以你的单酶切和双酶切条带大小一样，是因为你的两个酶切位点相近，都处在质粒集中酶切位点的那段序列上，单酶会产生一个线性条带，双酶切切开后会产生两个条带，一个大条带，一个小条带，大条带跟单酶切大小相似，所以难以分清高低，双酶切产生的小条带实在太小，基本看不到。
赞一下(4人) 回复此楼
8楼2014-10-19 10:32:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小木可 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭