应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 空质粒双酶切后大小不对，纠结！
121/2返回列表12下一页
查看: 3393  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cqjl2008

新虫 (初入文坛)

[求助] 空质粒双酶切后大小不对，纠结！

我要做酵母双杂交，把试剂盒里的质粒转化如DH5a后提质粒，然后双酶切，EcoR1,和BamH1过夜后跑电泳，酶切后质粒偏大，从marker开始向右依次是质粒1 酶切，原质粒1，质粒2酶切，原质粒2.   质粒1应该是8kb质粒2应该是7.3kb，结果都偏大，请教各位是什么原因呢？

2012-10-24_165738.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-26 13:00:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

david0308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-10-29 08:36:31
wizardfan: 金币+2, 代给金币 2013-01-25 04:03:53
大小的话是对不上的，这个不知道是什么原因，但是酶切之后质粒由超螺旋结构变成线性结构会由于阻力增大导致在胶中位置上移，但是按照楼主的说法质粒1双酶切后应在8kb左右而原质粒应该在更靠下的位置，个人认为可能是marker不准，有时候会有这种现象的，而且这个图告诉了你你双酶切应该确实切开了，而且切的很彻底，胶回收之后做进一步工作应该一点问题都没有，如果你实在不敢继续实验的话就把胶回收产物送去进行全序列测序，这样不推荐的~
赞一下(2人) 回复此楼
哈哈
7楼2012-10-29 02:39:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cqjl2008

新虫 (初入文坛)
忘了附上marker大小，从上到下依次是10kb,8000bp,6000bp,5000bp……
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-26 13:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cl19853
3楼2012-10-26 13:04:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
显然你点样顺序记错了！
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
4楼2012-10-26 13:45:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqjl2008

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 看天 at 2012-10-26 13:45:22
显然你点样顺序记错了！

不会啊，质粒切开后由双螺旋变成线性，阻力会增大 ，就该跑的慢一些啊
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-26 13:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cqjl2008 at 2012-10-26 13:50:20
不会啊，质粒切开后由双螺旋变成线性，阻力会增大 ，就该跑的慢一些啊...

那就不清楚了啊 不太懂
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
6楼2012-10-26 21:07:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqjl2008

新虫 (初入文坛)
8楼2012-12-23 18:25:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mguo15

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-01-25 04:04:09
david0308的回答很好。个人意见是你下次跑胶应该注意胶浓度，本图胶浓度过高。大分子量的样品也可以少上点，效果更好！
赞一下 回复此楼
9楼2012-12-25 11:21:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11ychen

铜虫 (小有名气)
个人觉得胶浓度可能不太合适，不过酶切很彻底。
赞一下 回复此楼
10楼2013-01-24 10:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cqjl2008 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-18 09:18 by yS4CkeWDhD6V
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 9/450 2026-09-18 09:16 by yS4CkeWDhD6V
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +8 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 9/450 2026-09-18 09:04 by yS4CkeWDhD6V
[基金申请] 国社科系统bug了，是不是要放榜了？ +6 kynobel 2026-09-16 7/350 2026-09-18 08:26 by llionlee007
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 3/150 2026-09-18 03:04 by cITaGg3p5edr
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 3/150 2026-09-18 02:54 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-18 02:16 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-18 01:04 by cITaGg3p5edr
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-18 00:28 by cITaGg3p5edr
[有机交流] 各位大神，目前国内有哪些比较好用的逆合成软件？ 20+3 zapen 2026-09-15 7/350 2026-09-17 16:40 by 北京莱茵编辑
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 5BDX0d0WFp7t 2026-09-15 4/200 2026-09-17 16:29 by 0ngsZVSCTS7z
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:53 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-17 12:39 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 11:27 by UAIjTRMuUFoj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:26 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 22:26 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:00 by i3KBRD19ERkG
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭