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cqjl2008

新虫 (初入文坛)

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[求助] 空质粒双酶切后大小不对，纠结！

我要做酵母双杂交，把试剂盒里的质粒转化如DH5a后提质粒，然后双酶切，EcoR1,和BamH1过夜后跑电泳，酶切后质粒偏大，从marker开始向右依次是质粒1 酶切，原质粒1，质粒2酶切，原质粒2. 质粒1应该是8kb质粒2应该是7.3kb，结果都偏大，请教各位是什么原因呢？

2012-10-24_165738.png

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1楼 2012-10-26 13:00:00

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david0308

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【答案】应助回帖

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wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-10-29 08:36:31
wizardfan: 金币+2, 代给金币 2013-01-25 04:03:53

大小的话是对不上的，这个不知道是什么原因，但是酶切之后质粒由超螺旋结构变成线性结构会由于阻力增大导致在胶中位置上移，但是按照楼主的说法质粒1双酶切后应在8kb左右而原质粒应该在更靠下的位置，个人认为可能是marker不准，有时候会有这种现象的，而且这个图告诉了你你双酶切应该确实切开了，而且切的很彻底，胶回收之后做进一步工作应该一点问题都没有，如果你实在不敢继续实验的话就把胶回收产物送去进行全序列测序，这样不推荐的~