应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pet28a双酶切出现这种情况
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 2933  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zouchuwuyan

新虫 (初入文坛)

[求助] pet28a双酶切出现这种情况

pet28a双酶切以后出现这种情况，怎么回事？
1和2是用bamH1和xho1切的，3和4是用bamH1和Hind3切的，求解，谢谢大家。

图片2.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-31 23:12:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-04-02 21:04:31
引用回帖:
4楼: Originally posted by zouchuwuyan at 2013-04-01 09:22:52
是双酶切，1,2都是bamH1和xho1双酶切，3,4都是用bamH1和Hind3双酶切。切开之后反而跑的快了。...

酶切过后应该是线状分子，理论上大小应该有5点几kb，应该比超螺旋质粒跑得慢才对。但怎么说也不应该有很多条带。感觉你酶切时的质粒用量太大。你试过用单酶切线性化载体与没有酶切的质粒跑电泳比较条带大小吗？
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-04-01 23:34:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zouchuwuyan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 18:13:20
感觉你的酶有问题，单酶切就出现那么多条带。检查一下质粒用量、酶的用量、buffer什么的。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zouchuwuyan
2楼2013-04-01 00:31:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjg0912

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 18:13:35
建议你去看看这个载体的酶切图谱，有这样的软件，你可以得到酶切后的片段，包括片段的数量以及大小。这样你以后做酶切实验就可以有的放矢了。
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-01 06:22:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zouchuwuyan

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-01 00:31:35
感觉你的酶有问题，单酶切就出现那么多条带。检查一下质粒用量、酶的用量、buffer什么的。

是双酶切，1,2都是bamH1和xho1双酶切，3,4都是用bamH1和Hind3双酶切。切开之后反而跑的快了。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-01 09:22:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zouchuwuyan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jjg0912 at 2013-04-01 06:22:17
建议你去看看这个载体的酶切图谱，有这样的软件，你可以得到酶切后的片段，包括片段的数量以及大小。这样你以后做酶切实验就可以有的放矢了。

载体图谱我倒是看过，这几个酶切位点应该都是单一的，只是想不明白，为什么会出现这种情况。   老师，能否推荐个好上手的酶切图谱分析软件。
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-01 09:30:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2013-04-01 10:03:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流，节日愉快 2013-04-01 16:08:50
本帖内容被屏蔽
7楼2013-04-01 10:07:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zouchuwuyan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nemo88 at 2013-04-01 10:03:59
首先  十分确定是pET28a？ 不确定可以做个测序 用T7 引物测一个反应即可

我找到问题了，，发现用的两个酶不是同一个公司的，，都换成了Thermo的，就行了，谢谢了，很感激
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-02 00:11:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zouchuwuyan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by nemo88 at 2013-04-01 10:07:54
如果确定是28a
那酶是否有问题  是否过期   操作过程中的条件是否会利于star活性的发生

分析酶切位点  可用primer， DNAMAN 等等软件
在线的NEB cutter也很好用 都可以显示出在整个序列中有几个同样的酶切位点 ...

我找到问题了，，发现用的两个酶不是同一个公司的，，都换成了Thermo的，就行了，谢谢了，很感激
赞一下 回复此楼
10楼2013-04-02 00:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zouchuwuyan 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +12 哦呦呼o 2026-04-04 12/600 2026-04-06 09:48 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程，初试344求专硕调剂 +4 15933906766 2026-04-05 4/200 2026-04-06 07:22 by hmn_wj
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 工科求调剂 +15 11ggg 2026-04-03 15/750 2026-04-05 16:24 by zzx2138
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 333求调剂 +12 wfh030413@ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 21:02 by jj987
[考研] 277求调剂 +4 12A3 2026-04-02 5/250 2026-04-04 20:28 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿0817化学工程与技术，求调剂 +24 我不是只因 2026-04-02 28/1400 2026-04-04 15:15 by dongzh2009
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +6 cs0106 2026-04-03 6/300 2026-04-04 11:20 by w_xuqing
[考研] 0856调剂 +8 曲听筠 2026-03-30 8/400 2026-04-04 08:46 by tianyyysss
[考研] 265求调剂 +20 梁梁校校 2026-04-01 21/1050 2026-04-04 00:38 by userper
[考研] 材料与化工调剂一志愿大连海事085600，349 +11 吃的不少 2026-03-30 11/550 2026-04-03 18:05 by Jimmyandyou
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 11/550 2026-04-03 13:32 by akdhjs
[考研] 土木水利328分求调剂 +6 疾风知劲草666 2026-04-02 6/300 2026-04-03 11:38 by znian
[考研] 材料调剂 +4 一样YWY 2026-04-03 4/200 2026-04-03 09:48 by 蓝云思雨
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 一志愿北京科技材料科学与工程288分，求调剂 +14 是辰啊 2026-04-02 14/700 2026-04-02 21:10 by dongzh2009
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-04-02 3/150 2026-04-02 15:06 by cal0306
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135，现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭