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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切温度控制
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一度冰火

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切温度控制

本人做双酶切是碰到两种酶的酶切温度不一样，一种是37度，一种是30度，请问大侠们我该如何调温度，是用30度呢还是用30和37的平均值啊，还有我用质粒双酶切后跑出条带发现有电泳图上的质粒上有蛋白质污染，请问各位大侠双酶切时有遇到这种现象吗，该怎么处理呢？
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快来找我吧！
1楼 2012-06-13 15:44:48
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切温度是指最佳酶切时的温度，可以综合考虑下两种酶温度变化的影响，进而选择合适的温度。
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2楼2012-06-13 16:21:43
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
选择30度比较好点。选37度，可能其中一个酶会不稳定，容易失活或者出现星活性。
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3楼2012-06-13 16:56:24
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whwshzdx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-06-19 13:43:07
takara上有双酶切的表都是在37度，30度的酶是Bamh1吗，Bamh1酶切效果很好（37度），也可以分步酶切你的东西量多的话酶切要延长时间
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4楼2012-06-17 00:44:58
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一度冰火

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by whwshzdx at 2012-06-17 00:44:58
takara上有双酶切的表都是在37度，30度的酶是Bamh1吗，Bamh1酶切效果很好（37度），也可以分步酶切你的东西量多的话酶切要延长时间

呵呵，我的其中一个内切酶就是BAMH1 的，那我试下37度，谢谢了
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快来找我吧！
5楼2012-06-18 16:57:05
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suifeng91

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先低温后高温(buffer不同可抽提或跑胶分离纯化)；
先低盐后高盐。
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人生不是一场物质的盛宴，而是一次灵魂的修炼，使它在谢幕之时比开幕之初更为高尚。
6楼2012-06-18 22:45:41
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angie8610

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果可以用同一种buffer的话可以先30度切后在不加另一种酶37度切，我是这样做的！
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新手上路，多多关照！
7楼2012-08-28 16:12:03
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议先低温后高温
先30度切，再37度切~
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8楼2012-08-28 21:40:14
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