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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切体系是什么意思
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)

[求助] 双酶切体系是什么意思

各位大侠，请问一下下面的这个双酶切体系是什么意思？能否举个例子，谢谢
Double Digestion with BamHI, NdeI
We recommend:
Buffer 2X Tango?
2-fold excess of BamHI
2-fold excess of NdeI
Incubate at 37°C
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在这个纷绕的世俗世界里，能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切，也是一种境界。
1楼2011-07-02 11:26:42
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 似的 2011-07-02 15:42:24
意思就是用BamHI, NdeI两个酶去切呀。
后面是推荐的酶切条件（buffer浓度、酶量、酶切温度）。
楼主想问什么啊？
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2楼2011-07-02 15:26:07
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shuifen1108

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 分成几段不一定啊 2011-07-02 15:42:39
就是用两个酶BamHI和NdeI去切质粒，将环形的质粒分成两段线性的DNA片段
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3楼2011-07-02 15:38:19
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good!讲得很清楚了！ 2011-07-02 16:48:36
xuqingchun33(金币+1): 2011-07-03 12:49:56
引用回帖:
Originally posted by xuqingchun33 at 2011-07-02 11:26:42:
各位大侠，请问一下下面的这个双酶切体系是什么意思？能否举个例子，谢谢
Double Digestion with BamHI, NdeI
We recommend:
Buffer 2X Tango?
2-fold excess of BamHI
2-fold excess of NdeI
Incubate at  ...

一看就知道楼主用的是fermentas公司的限制性内切酶。
Double Digestion with BamHI, NdeI就是选择的酶是BamHI, NdeI。
We recommend:
Buffer 2X Tango该公司推荐使用的酶切缓冲液是2X Tango，就是加酶切体系总体积的1/5的10X Tango。
2-fold  excess of BamHI
2-fold excess of NdeI因为这两个酶在2X Tango条件下活性都只有50-100%，不是100%，为了保证切割效率，所以加入的酶量是2倍。
Incubate at 37°C 这个就是酶切温度了。
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4楼2011-07-02 16:09:34
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): 鼓励分享经验。水浴这个缺点第一次听说，学习了！ 2011-07-02 17:54:28
xuqingchun33(金币+1): 2011-07-03 12:50:03
我也用fermentas公司的限制性内切酶。一般40ul  体系的话，10X Tango 8ul， BamHI, NdeI各0.8ul 。37°C放培养箱酶切过夜就可，或3-4小时，不建议水浴，因为离心管上下部温度不一致，还造成挥发。
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生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
5楼2011-07-02 17:17:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
水浴这个.......................
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-07-02 18:16:15
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
虽然我们也是放培养箱，不过很多人也用水浴，应该木有大问题吧……
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7楼2011-07-02 18:39:37
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3, EPI+1): 很有经验啊！酶的用量是可以省一些，大不了切久点就好了。很多酶在1X和2X tango中活性差别很大，可根据Fermentas那个表，用1X时就加总体积1/10的10X tango，用2X时就加1/5. 2011-07-02 21:02:51
xuqingchun33(金币+1): 2011-07-03 12:50:07
放培养箱和水浴锅没有什么影响，只要保证在这个温度下酶的效率是最大发挥的就没有什么问题，有时候室内温度高，可以达到30几度，照样室温进行酶切；

另外buffer 2x tango,就是1/5的比例，就是总体积的五分之一，50ul体系的话添加10ul ，一般如果没有特殊说明的话就是1/10,加5ul；

至于酶，也就是按照原体系量的二倍来加，因为两种酶的活性在此条件和buffer下不是很高，很有可能是50%，比如50ul体系，加2ul，现在加4ul，其实个人认为具体实验中加2ul就可以了，不需要加那么多酶，浪费。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2011-07-02 20:52:28
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