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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒酶切求救
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513279618

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切求救

各位大侠，我实在想不明白了！！
我的重组质粒用单酶切切不下来，双酶切就能切成三段，会是什么原因呢？？！！
已经切过两次了，都是这种情况！
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1楼2011-04-23 17:58:50
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★
513279618(金币+1): 2011-04-24 10:33:19
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流，欢迎常来 2011-04-25 20:16:31
1.确定酶没有失活
2.确定单酶切的时候buff对了吗，酶的在buff中活性怎么样，酶切的时候酶量是否足够，酶切体系是否很好
3.确定双酶切的时候不是用于单酶切的那个酶在载体上的酶切位点的单一性
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
2楼2011-04-23 19:27:38
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-25 20:16:43
单酶切切不下来是指什么？切了之后片段大小不对？双酶切时用的其中一种酶是单酶切用的那种吗？如果是，会不会单酶切的时候体系不太好，酶量不够。双酶切时使用的另一种酶是不是在重组质粒上只有一个酶切位点。
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2011-04-25 09:10:27
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513279618

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2011-04-25 09:10:27:
单酶切切不下来是指什么？切了之后片段大小不对？双酶切时用的其中一种酶是单酶切用的那种吗？如果是，会不会单酶切的时候体系不太好，酶量不够。双酶切时使用的另一种酶是不是在重组质粒上只有一个酶切位点。

我进行双酶切的时候，两种美都进行单酶切了，其中一个单酶切没有切出条带，另一个单酶切切出两条带，双酶切是三条带。所以我郁闷了！！
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4楼2011-04-26 21:09:35
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zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
reasonspare(金币+1): 积极交流奖 2011-04-27 11:33:52
没有切出条带是什么意思，就是说把质粒切成线形吧。另一个切出二条带，加上载体应该是三条带吧，一起酶切多一条带很正常啊
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5楼2011-04-27 10:31:41
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zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

513279618(金币+2): 2011-04-27 20:48:32
应该是第一种酶在质粒上只有一个酶切位点，第二种酶应该有3个酶切位点，双酶切应该是四条带
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6楼2011-04-27 10:34:45
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513279618

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2011-04-27 10:31:41:
没有切出条带是什么意思，就是说把质粒切成线形吧。另一个切出二条带，加上载体应该是三条带吧，一起酶切多一条带很正常啊

可是没切出条带的酶，酶切后，质粒大小与原来的质粒大小一样，像是没有切开。
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7楼2011-04-27 20:49:50
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violet.zhou

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

513279618(金币+1): 2011-04-28 20:09:51
513279618(金币+1): 2011-05-02 21:54:58
应该是有的双酶切成功，有的只是单酶切成功了，这样的话不难解释有三条带。
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8楼2011-04-28 11:21:46
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zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

513279618(金币+1): 2011-04-28 20:10:01
引用回帖:
Originally posted by 513279618 at 2011-04-27 20:49:50:
可是没切出条带的酶，酶切后，质粒大小与原来的质粒大小一样，像是没有切开。

你也说是像是，又没有肯定，只看质粒电泳大小不准
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9楼2011-04-28 15:03:10
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513279618

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2011-04-28 15:03:10:
你也说是像是，又没有肯定，只看质粒电泳大小不准

除了跑电泳，还有别的方法验证环形和线性的质粒吗 ？我应该算酶切成功吗？
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10楼2011-04-28 20:09:00
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