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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】不完全酶切
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匿名

用户注销 (著名写手)
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1楼2011-01-01 11:04:45
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2011-01-02 13:18:29
部分酶切也是随机的呀~你想想其他的解决方案吧
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2楼2011-01-01 12:58:59
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-01 22:35:17
遇到这种情况也只能重新更换载体了。酶切的话肯定是两个酶切位点都会被切开的！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-01-01 13:22:37
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3):good 2011-01-01 21:18:56
这个可以做的，叫partial digest。就是控制酶用量和酶切时间，我一般酶用量用1/10，时间可以用5，10，15分钟，时间到了加loading buffer放冰上终止，这个实验是分子克隆的较难的，因为条件必须自己摸索，与质粒质量，酶效率有关（比如NotI只和用量有关，和基本时间无关）。
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4楼2011-01-01 15:42:01
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
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当然前提是你所需要的片段能和其他可能出现的片段可以电泳区分开来
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5楼2011-01-01 16:03:00
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jerry110

新虫 (小有名气)
★
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部分酶切，又学到一些东西，呵呵
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6楼2011-01-01 20:50:40
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zgb1982

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-01-01 13:22:37:
遇到这种情况也只能重新更换载体了。酶切的话肯定是两个酶切位点都会被切开的！

牛，还真不知道这回事
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7楼2011-01-01 21:15:12
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ideal9268

铜虫 (小有名气)
★
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我也遇到过这种情况，用的就是不完全酶切，酶的用量和酶切时间要控制好，多试几次，完全可以切出你想切的那个位点。
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8楼2011-01-01 21:26:26
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
加入酶，37度反应20分钟后，立即放65度灭活，跑胶看结果，应该有直切一个位点的条带！
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9楼2011-01-01 21:55:43
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