| 查看: 3210 | 回复: 15 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
酶切专家金虫 (小有名气)
|
[求助]
关于EcoRI的部分酶切
|
||
|
我准备用EcoRI+XbaI在我的质粒上克隆外源基因，但酶切验证时发现在质粒上有两个EcoRI位点，所以不得不进行部分酶切。 我的计划是：先用XbaI进行完全酶切，然后加少量EcoRI，进行部分酶切（希望出现只在一个EcoRI位点切开的条带），然后回收在我希望的位点切开的那条带，进行克隆。 我已经尝试了一次，发现即使只酶切5分钟，质粒上的两个EcoRI都全切开了。大家有相关经验吗？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有159人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助：关于BamHI SalI 双酶切的问题
已经有16人回复
- 关于酶切验证克隆的一点点小疑问！
已经有5人回复
- 关于酶切的小问题
已经有10人回复
- 分子生物版之电泳专题-重金奖励
已经有67人回复
- 关于酶切的问题
已经有5人回复
- 求教关于用QIAquick PCR Purification Kit 是否能用来回收双酶切过的pcr产物
已经有3人回复
- 求助！请问 NdeI 和EcoRI 同时做酶切可以吗？
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于双酶切
已经有6人回复
- 【求助/交流】部分酶切的电泳图不知为何成这个样子？有经验的虫虫们帮忙解释一下吧！
已经有10人回复
- 【求助/交流】Sau3AI 部分酶切
已经有8人回复
- 【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题
已经有21人回复
- 【求助/交流】请教关于pPIC9K EcoRI 单酶切
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于酶切问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】ECORI酶切反应体系体积可加大吗
已经有6人回复
panda73
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 3
- 应助: 80 (初中生)
- 金币: 1201.3
- 散金: 44
- 红花: 2
- 帖子: 191
- 在线: 42.5小时
- 虫号: 985964
- 注册: 2010-03-30
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 听起来好难…… 2012-03-18 17:50:09
酶切专家: 回帖置顶 2012-03-19 20:47:18
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 根据楼主反馈，切实可行，授予EPI！ 2012-03-20 11:44:26
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 听起来好难…… 2012-03-18 17:50:09
酶切专家: 回帖置顶 2012-03-19 20:47:18
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 根据楼主反馈，切实可行，授予EPI！ 2012-03-20 11:44:26
|
我以前做过类似的部分酶切实验： 我得经验如下： 首先必须精确计算所需的酶量。我曾经在小木虫推荐过一个软件（Ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｄｅｓｉｇｎｅｒ），你可以利用该软件精确计算出ＥｃｏＲＩ的用量，然后将其理论用量减少１／２或２／３，将酶切时间缩短到５分钟，应该没问题。。（注意，酶一定先稀释１０倍以上，然后从稀释的酶样品中取出所需的酶量，否则，由于原酶中含５０％甘油，误差太大，肯定效果不好）。 如果这种克隆都能成功，你可以藐视大部分的分子克隆工作。 祝一切顺利。 |
10楼2012-03-18 15:23:09
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
13楼2012-03-19 20:51:42
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
14楼2012-03-22 20:39:52
sarah_lz
金虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1139.4
- 红花: 4
- 帖子: 235
- 在线: 127.2小时
- 虫号: 368230
- 注册: 2007-05-11
- 性别: MM
- 专业: 神经生物学
4楼2012-03-17 21:42:35
0624410024
金虫 (正式写手)
Begging for knowledge
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1673.2
- 散金: 22
- 红花: 3
- 帖子: 411
- 在线: 136.6小时
- 虫号: 942812
- 注册: 2010-01-15
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
9楼2012-03-18 10:16:30
blastfeng
金虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1527.5
- 散金: 101
- 红花: 1040
- 帖子: 291
- 在线: 89.8小时
- 虫号: 1433109
- 注册: 2011-10-09
- 性别: GG
- 专业: 细胞死亡
2楼2012-03-17 19:11:18
a731705125
银虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 330.2
- 红花: 1
- 帖子: 135
- 在线: 23小时
- 虫号: 1205543
- 注册: 2011-02-18
- 专业: 免疫生物学
3楼2012-03-17 20:40:19
sunwei57
木虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 3813.2
- 帖子: 225
- 在线: 84.5小时
- 虫号: 1696471
- 注册: 2012-03-16
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
5楼2012-03-18 00:19:37
6楼2012-03-18 00:43:28
lixg
铁杆木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 7627.1
- 散金: 1
- 红花: 7
- 帖子: 591
- 在线: 106.4小时
- 虫号: 859417
- 注册: 2009-09-29
- 专业: 发育生物学
7楼2012-03-18 08:30:23
joan198108
铁杆木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 107 (高中生)
- 金币: 6525.2
- 散金: 12
- 红花: 3
- 帖子: 842
- 在线: 413.5小时
- 虫号: 859607
- 注册: 2009-09-29
- 性别: GG
- 专业: 生物技术药物
8楼2012-03-18 08:54:42
