应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于酶切的问题
61/1返回列表
查看: 1729  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xingxing8713

银虫 (小有名气)

[求助] 关于酶切的问题

我现在要用Act，Ter，Puc57构建一个载体，酶切位点是HindIII，Sse8387I(即Sdal)，现在要把Act，Ter做双酶切，Puc57用HindIII酶切，问下50ul 酶切体系各组分多少合适，用什么酶和BUFFER啊？酶切之后，只有PUC57做去磷酸化吗？做连接时必须3片段同时连吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-20 00:22:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-20 09:43:09
做酶切要看你用的哪个公司的酶，根据那个公司酶的说明书来看用什么相应的buffer，酶切体系的组分要看你的DN2A浓度来定。去磷酸化无所谓（这个有些人可能有不同意见，我是自己做了10多年实验的经验，你如果不放心就做），连接时3个片段也可以同时连，我同时连过4个片段，关键要控制好各片段的比例。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-08-20 00:53:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingxing8713

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by yguang at 2011-08-20 00:53:36:
做酶切要看你用的哪个公司的酶，根据那个公司酶的说明书来看用什么相应的buffer，酶切体系的组分要看你的DN2A浓度来定。去磷酸化无所谓（这个有些人可能有不同意见，我是自己做了10多年实验的经验，你如果不放心就 ...

为啥要去磷酸化呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2011-08-20 10:06:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xingxing8713(金币+5): 谢谢你，请问可以都去磷酸化吗？ 2011-08-20 10:27:27
通常浓度的载体50ul体系双酶切，我们用2-2.5ul的酶，buffer与酶配套使用的。去磷酸化是为了防止单酶切后的载体自连，所以只有PUC57需要做去磷酸化。
赞一下 回复此楼
生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
4楼2011-08-20 10:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingxing8713

银虫 (小有名气)
可以都去磷酸化吗？
赞一下 回复此楼
5楼2011-08-20 10:28:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

去磷酸化只是为了防止切开后自己又连上，双酶切的产物粘性末端一般不是相同的，就没必要去磷酸化。
赞一下 回复此楼
生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
6楼2011-08-20 18:53:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xingxing8713 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭