24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1327  |  回复: 5

xingxing8713

银虫 (小有名气)

[求助] 关于酶切的问题

我现在要用Act,Ter,Puc57构建一个载体,酶切位点是HindIII,Sse8387I(即Sdal),现在要把Act,Ter做双酶切,Puc57用HindIII酶切,问下50ul 酶切体系各组分多少合适,用什么酶和BUFFER啊?酶切之后,只有PUC57做去磷酸化吗?做连接时必须3片段同时连吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-20 09:43:09
做酶切要看你用的哪个公司的酶,根据那个公司酶的说明书来看用什么相应的buffer,酶切体系的组分要看你的DN2A浓度来定。去磷酸化无所谓(这个有些人可能有不同意见,我是自己做了10多年实验的经验,你如果不放心就做),连接时3个片段也可以同时连,我同时连过4个片段,关键要控制好各片段的比例。
2楼2011-08-20 00:53:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingxing8713

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by yguang at 2011-08-20 00:53:36:
做酶切要看你用的哪个公司的酶,根据那个公司酶的说明书来看用什么相应的buffer,酶切体系的组分要看你的DN2A浓度来定。去磷酸化无所谓(这个有些人可能有不同意见,我是自己做了10多年实验的经验,你如果不放心就 ...

为啥要去磷酸化呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2011-08-20 10:06:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xingxing8713(金币+5): 谢谢你,请问可以都去磷酸化吗? 2011-08-20 10:27:27
通常浓度的载体50ul体系双酶切,我们用2-2.5ul的酶,buffer与酶配套使用的。去磷酸化是为了防止单酶切后的载体自连,所以只有PUC57需要做去磷酸化。
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
4楼2011-08-20 10:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingxing8713

银虫 (小有名气)

可以都去磷酸化吗?
5楼2011-08-20 10:28:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

去磷酸化只是为了防止切开后自己又连上,双酶切的产物粘性末端一般不是相同的,就没必要去磷酸化。
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
6楼2011-08-20 18:53:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xingxing8713 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-04 9/450 2026-04-06 00:06 by 永字号
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 9/450 2026-04-05 22:24 by dongzh2009
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +11 zyx上岸! 2026-04-05 11/550 2026-04-05 22:13 by dongzh2009
[考研] 298求调剂 +3 manman511 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:09 by kk112233
[考研] 求调剂 +4 wos666 2026-04-03 4/200 2026-04-05 11:48 by arrow8852
[考研] 一志愿西北农林畜牧专硕336分求调剂 +3 5ourr 2026-04-03 3/150 2026-04-05 10:40 by JOKER0401
[考研] 081700化学工程与技术 一志愿中海洋 323 求调剂学校 +16 披星河 2026-04-03 16/800 2026-04-05 09:00 by dick_runner
[考研] 考研调剂 +6 15615482637 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:43 by yu221
[考研] 材料调剂 +15 一样YWY 2026-04-01 15/750 2026-04-04 22:23 by hemengdong
[考研] 278求调剂 +14 范婷娜 2026-04-04 15/750 2026-04-04 22:15 by lqwchd
[考研] 085400电子信息319求调剂(接受跨专业调剂) +5 星星不眨眼喽 2026-04-03 6/300 2026-04-04 21:50 by hemengdong
[考研] 342求调剂 +3 Liang7111 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:47 by dongzh2009
[考研] 本9一志愿2 0854低分专硕286求调剂 +9 芒种111 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:01 by tangruihua
[考研] 数二英二348求调剂 +4 hxdzj1 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:25 by zhq0425
[考研] 11408,284分,二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考研] 0705理学294求调剂 +3 成果成果cg5 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:04 by simons1972
[考研] 一志愿安徽大学0817化学工程与技术,求调剂 +14 我不是只因 2026-04-02 15/750 2026-04-03 09:49 by 蓝云思雨
[考研] 318求调剂 +3 笃行致远. 2026-03-31 4/200 2026-04-02 15:56 by Jaylen.
[考研] 求调剂:一志愿:南京大学 专业:0705 总分320 ,本科985,四六级已过 +3 lfy760306 2026-03-31 3/150 2026-04-01 01:57 by Creta
信息提示
请填处理意见