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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：分子新手关于酶切位点的问题
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麻花13

新虫 (小有名气)

[求助] 求助：分子新手关于酶切位点的问题

情况是这样的：构建载体，选择合适的酶切位点，突然发现目的基因5'端的酶切位点NdeI在其内部也存在，试图改变酶切位点，要命的是，载体上（pET22b）合适的酶切位点只有NdeI
我想尝试依旧用NdeI切目的基因，不知道可行否？如果一段基因具有两个相同的酶切位点，内切酶是先切端点的序列内？还是切内部的序列

[ Last edited by wanhscn on 2012-2-25 at 15:28 ]
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1楼 2012-02-24 21:11:31
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smilerion

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以做重组，只切载体
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2楼2012-02-25 02:35:52
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新换载体吧！这样在你的目的基因上没法切出NdeI粘性末端呀，一切，目的片段就成两段了。
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3楼2012-02-25 10:40:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基因内部也有相应酶切位点肯定不能用，建议换载体。实在不想换载体的话，考虑PCR突变基因内部的酶切位点。
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4楼2012-02-25 13:56:50
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