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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pET-28a的酶切位点
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】pET-28a的酶切位点

最近我想做个异源表达，用pET-28a系统。但是现在发现有些酶切位点加在ATG前以后引物形成比较难看的发夹，我担心效果不好。所以想扩大酶切位点的选择范围。想请教一下同志们，根据载体图谱，别人建议我从BamH I开始选择，多克隆位点是从Nco I开始的，只是它包括了His-tag还有T7-Tag,并且好像在多克隆位点前后部分各有一个His-tag是不是可以把前面一个切掉啊，那个T7-tag是什么作用啊？多谢指教了。
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1楼 2010-10-22 15:19:49
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
不要沉了
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2楼2010-10-25 10:47:47
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-25 15:47:55
linxi8579(金币+3): 2010-10-26 09:28:25
那只是一个标记而已,我个人认为只要不切到RBS 和Lac 一般不会影响你的目的片段的表达.顺便问你一句:你上面的那个引物应该没事.引物绝对没发卡结构是不现实的.
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3楼2010-10-25 15:27:26
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graper

银虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):欢迎多来交流。 2010-10-25 19:00:43
我刚开始接触引物设计和PCR   。。。。  帮顶  
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4楼2010-10-25 18:59:55
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by leezz at 2010-10-25 15:27:26:
那只是一个标记而已,我个人认为只要不切到RBS 和Lac 一般不会影响你的目的片段的表达.顺便问你一句:你上面的那个引物应该没事.引物绝对没发卡结构是不现实的.

只是我的引物32bp除了中间的7bp两边都在发夹里了，我是用cDNA来扩，非常不好扩，所以想引物质量应该高一点，可是这对引物的确用DNA扩出来了。还有您说的RBS我在质粒里都见过，可是它具体是什么东西啊？非常感谢了。
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5楼2010-10-26 09:51:45
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
linxi8579(金币+2): 2010-10-27 15:54:37
RBS 是核糖体结合位点
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6楼2010-10-26 12:06:30
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by leezz at 2010-10-26 12:06:30:
RBS 是核糖体结合位点

哦，非常感谢啦。
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7楼2010-10-27 15:54:59
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