24小时热门版块排行榜    

查看: 4350  |  回复: 6

linxi8579

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】pET-28a的酶切位点

最近我想做个异源表达,用pET-28a系统。但是现在发现有些酶切位点加在ATG前以后引物形成比较难看的发夹,我担心效果不好。所以想扩大酶切位点的选择范围。想请教一下同志们,根据载体图谱,别人建议我从BamH I开始选择,多克隆位点是从Nco I开始的,只是它包括了His-tag还有T7-Tag,并且好像在多克隆位点前后部分各有一个His-tag是不是可以把前面一个切掉啊,那个T7-tag是什么作用啊?多谢指教了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

2楼2010-10-25 10:47:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-25 15:47:55
linxi8579(金币+3): 2010-10-26 09:28:25
那只是一个标记而已,我个人认为只要不切到RBS 和Lac 一般不会影响你的目的片段的表达.顺便问你一句:你上面的那个引物应该没事.引物绝对没发卡结构是不现实的.
3楼2010-10-25 15:27:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

graper

银虫 (小有名气)


dhd997(金币+1):欢迎多来交流。 2010-10-25 19:00:43
我刚开始接触引物设计和PCR   。。。。  帮顶  
4楼2010-10-25 18:59:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by leezz at 2010-10-25 15:27:26:
那只是一个标记而已,我个人认为只要不切到RBS 和Lac 一般不会影响你的目的片段的表达.顺便问你一句:你上面的那个引物应该没事.引物绝对没发卡结构是不现实的.

只是我的引物32bp除了中间的7bp两边都在发夹里了,我是用cDNA来扩,非常不好扩,所以想引物质量应该高一点,可是这对引物的确用DNA扩出来了。还有您说的RBS我在质粒里都见过,可是它具体是什么东西啊?非常感谢了。
5楼2010-10-26 09:51:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

linxi8579(金币+2): 2010-10-27 15:54:37
RBS 是核糖体结合位点
6楼2010-10-26 12:06:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by leezz at 2010-10-26 12:06:30:
RBS 是核糖体结合位点

哦,非常感谢啦。
7楼2010-10-27 15:54:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linxi8579 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见