24小时热门版块排行榜    

查看: 5539  |  回复: 7

hxy2011

金虫 (小有名气)


[交流] pET-28a载体移码突变问题

我准备克隆并表达一段基因的全长。我选的载体是pET28a表达载体。分别在前向引物和后向引物的5端加HindIII和XhoI这两个酶切位点用于定向克隆。
设计引物时我注意到从ATG到HindIII之间碱基数目不是3的倍数,这样在设计引物时需要考虑移码突变的问题吗?又如何避免引起移码突变的产生?需要在HindIII位点之后补充2个碱基加以避免吗?请高手多多指教啊。谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangbin1

金虫 (正式写手)


★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
你说得对。在HindIII位点之后补充2个碱基,注意补充之后新形成的密码子能翻译成特定氨基酸。上游设计EcoRI 或hindIII多好,不会有这种问题。
2楼2011-12-05 20:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)


没办法,没有酶切位点了,只有用这两个了。看来要重新设计引物了,今天才发现的问题。那么只要加入的两个碱基与前一个碱基翻译成任何一个氨基酸都可以吗?
3楼2011-12-05 21:29:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by yangbin1 at 2011-12-05 20:27:42:
你说得对。在HindIII位点之后补充2个碱基,注意补充之后新形成的密码子能翻译成特定氨基酸。上游设计EcoRI 或hindIII多好,不会有这种问题。

没办法,没有酶切位点了,只有用这两个了。看来要重新设计引物了,今天才发现的问题。那么只要加入的两个碱基与前一个碱基翻译成任何一个氨基酸都可以吗?
4楼2011-12-05 21:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
这个需要补充至3的倍数吗?如果这样的话,前面质粒本身的起始密码子之后的核苷酸数目也要考虑了吧?
5楼2011-12-06 14:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by joan198108 at 2011-12-06 14:53:26:
这个需要补充至3的倍数吗?如果这样的话,前面质粒本身的起始密码子之后的核苷酸数目也要考虑了吧?

出现移码突变就是因为质粒本身携带有Met密码子,等翻译到此位点后不是3的倍数了。给你看张图片。pE-T28a的多克隆位点附近序列。


6楼2011-12-06 16:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


内容已删除
7楼2011-12-06 18:17:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
wyh8188楼
2014-10-22 21:05   回复  
hxy2011(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 hxy2011 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:37 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:30 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:24 by etmYJ6d2rquH
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:13 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 7/350 2026-09-29 14:07 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-29 13:56 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意! +8 zju2000 2026-09-26 9/450 2026-09-29 13:47 by ahsoarli
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[找工作] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
请填处理意见