应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-28a载体移码突变问题
81/1返回列表
查看: 4897  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hxy2011

金虫 (小有名气)

[交流] pET-28a载体移码突变问题

我准备克隆并表达一段基因的全长。我选的载体是pET28a表达载体。分别在前向引物和后向引物的5端加HindIII和XhoI这两个酶切位点用于定向克隆。
设计引物时我注意到从ATG到HindIII之间碱基数目不是3的倍数，这样在设计引物时需要考虑移码突变的问题吗？又如何避免引起移码突变的产生？需要在HindIII位点之后补充2个碱基加以避免吗？请高手多多指教啊。谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-12-05 17:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangbin1

金虫 (正式写手)
★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
你说得对。在HindIII位点之后补充2个碱基，注意补充之后新形成的密码子能翻译成特定氨基酸。上游设计EcoRI 或hindIII多好，不会有这种问题。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-12-05 20:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)
没办法，没有酶切位点了，只有用这两个了。看来要重新设计引物了，今天才发现的问题。那么只要加入的两个碱基与前一个碱基翻译成任何一个氨基酸都可以吗？
赞一下 回复此楼
3楼2011-12-05 21:29:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangbin1 at 2011-12-05 20:27:42:
你说得对。在HindIII位点之后补充2个碱基，注意补充之后新形成的密码子能翻译成特定氨基酸。上游设计EcoRI 或hindIII多好，不会有这种问题。

没办法，没有酶切位点了，只有用这两个了。看来要重新设计引物了，今天才发现的问题。那么只要加入的两个碱基与前一个碱基翻译成任何一个氨基酸都可以吗？
赞一下 回复此楼
4楼2011-12-05 21:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
这个需要补充至3的倍数吗？如果这样的话，前面质粒本身的起始密码子之后的核苷酸数目也要考虑了吧？
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-12-06 14:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by joan198108 at 2011-12-06 14:53:26:
这个需要补充至3的倍数吗？如果这样的话，前面质粒本身的起始密码子之后的核苷酸数目也要考虑了吧？

出现移码突变就是因为质粒本身携带有Met密码子，等翻译到此位点后不是3的倍数了。给你看张图片。pE-T28a的多克隆位点附近序列。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-12-06 16:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
内容已删除
回复此楼
7楼2011-12-06 18:17:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
wyh8188楼
2014-10-22 21:05   回复  
hxy2011(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 hxy2011 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 321求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:41 by Linda Hu
[考研] 化学调剂0703 +7 啊我我的 2026-03-11 7/350 2026-03-15 23:03 by 凌千颂111
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 清风问长安 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:15 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭