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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-28a载体移码突变问题
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hxy2011

金虫 (小有名气)

[交流] pET-28a载体移码突变问题

我准备克隆并表达一段基因的全长。我选的载体是pET28a表达载体。分别在前向引物和后向引物的5端加HindIII和XhoI这两个酶切位点用于定向克隆。
设计引物时我注意到从ATG到HindIII之间碱基数目不是3的倍数，这样在设计引物时需要考虑移码突变的问题吗？又如何避免引起移码突变的产生？需要在HindIII位点之后补充2个碱基加以避免吗？请高手多多指教啊。谢谢！
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1楼 2011-12-05 17:10:08
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yangbin1

金虫 (正式写手)
★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
你说得对。在HindIII位点之后补充2个碱基，注意补充之后新形成的密码子能翻译成特定氨基酸。上游设计EcoRI 或hindIII多好，不会有这种问题。
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2楼2011-12-05 20:27:42
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