应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-28a载体移码突变问题
51/1返回列表
查看: 4900  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)

[交流] pET-28a载体移码突变问题

我准备克隆并表达一段基因的全长。我选的载体是pET28a表达载体。分别在前向引物和后向引物的5端加HindIII和XhoI这两个酶切位点用于定向克隆。
设计引物时我注意到从ATG到HindIII之间碱基数目不是3的倍数，这样在设计引物时需要考虑移码突变的问题吗？又如何避免引起移码突变的产生？需要在HindIII位点之后补充2个碱基加以避免吗？请高手多多指教啊。谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-12-05 17:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by joan198108 at 2011-12-06 14:53:26:
这个需要补充至3的倍数吗？如果这样的话，前面质粒本身的起始密码子之后的核苷酸数目也要考虑了吧？

出现移码突变就是因为质粒本身携带有Met密码子，等翻译到此位点后不是3的倍数了。给你看张图片。pE-T28a的多克隆位点附近序列。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-12-06 16:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yangbin1

金虫 (正式写手)
★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
你说得对。在HindIII位点之后补充2个碱基，注意补充之后新形成的密码子能翻译成特定氨基酸。上游设计EcoRI 或hindIII多好，不会有这种问题。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-12-05 20:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)
没办法，没有酶切位点了，只有用这两个了。看来要重新设计引物了，今天才发现的问题。那么只要加入的两个碱基与前一个碱基翻译成任何一个氨基酸都可以吗？
赞一下 回复此楼
3楼2011-12-05 21:29:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxy2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangbin1 at 2011-12-05 20:27:42:
你说得对。在HindIII位点之后补充2个碱基，注意补充之后新形成的密码子能翻译成特定氨基酸。上游设计EcoRI 或hindIII多好，不会有这种问题。

没办法，没有酶切位点了，只有用这两个了。看来要重新设计引物了，今天才发现的问题。那么只要加入的两个碱基与前一个碱基翻译成任何一个氨基酸都可以吗？
赞一下 回复此楼
4楼2011-12-05 21:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-15 7/350 2026-03-16 09:43 by 闲人终南山
[考研] 344求调剂 +3 knight344 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:42 by 无际的草原
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分，求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:56 by houyaoxu
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 纺织、生物、化学、材料相关专业招生了 +4 耶耶业 2026-03-09 7/350 2026-03-12 19:05 by Equinoxhua
[考研] 294 英二数二物化 求调剂 +6 米饭团不好吃 2026-03-09 6/300 2026-03-09 23:55 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭