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linxi8579

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】pET-28a的酶切位点

最近我想做个异源表达,用pET-28a系统。但是现在发现有些酶切位点加在ATG前以后引物形成比较难看的发夹,我担心效果不好。所以想扩大酶切位点的选择范围。想请教一下同志们,根据载体图谱,别人建议我从BamH I开始选择,多克隆位点是从Nco I开始的,只是它包括了His-tag还有T7-Tag,并且好像在多克隆位点前后部分各有一个His-tag是不是可以把前面一个切掉啊,那个T7-tag是什么作用啊?多谢指教了。
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-25 15:47:55
linxi8579(金币+3): 2010-10-26 09:28:25
那只是一个标记而已,我个人认为只要不切到RBS 和Lac 一般不会影响你的目的片段的表达.顺便问你一句:你上面的那个引物应该没事.引物绝对没发卡结构是不现实的.
3楼2010-10-25 15:27:26
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graper

银虫 (小有名气)


dhd997(金币+1):欢迎多来交流。 2010-10-25 19:00:43
我刚开始接触引物设计和PCR   。。。。  帮顶  
4楼2010-10-25 18:59:55
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by leezz at 2010-10-25 15:27:26:
那只是一个标记而已,我个人认为只要不切到RBS 和Lac 一般不会影响你的目的片段的表达.顺便问你一句:你上面的那个引物应该没事.引物绝对没发卡结构是不现实的.

只是我的引物32bp除了中间的7bp两边都在发夹里了,我是用cDNA来扩,非常不好扩,所以想引物质量应该高一点,可是这对引物的确用DNA扩出来了。还有您说的RBS我在质粒里都见过,可是它具体是什么东西啊?非常感谢了。
5楼2010-10-26 09:51:45
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

linxi8579(金币+2): 2010-10-27 15:54:37
RBS 是核糖体结合位点
6楼2010-10-26 12:06:30
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