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xingxing8713

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[求助] 关于酶切的问题

我现在要用Act，Ter，Puc57构建一个载体，酶切位点是HindIII，Sse8387I(即Sdal)，现在要把Act，Ter做双酶切，Puc57用HindIII酶切，问下50ul 酶切体系各组分多少合适，用什么酶和BUFFER啊？酶切之后，只有PUC57做去磷酸化吗？做连接时必须3片段同时连吗？

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1楼 2011-08-20 00:22:47

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yguang

木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-20 09:43:09

做酶切要看你用的哪个公司的酶，根据那个公司酶的说明书来看用什么相应的buffer，酶切体系的组分要看你的DN2A浓度来定。去磷酸化无所谓（这个有些人可能有不同意见，我是自己做了10多年实验的经验，你如果不放心就做），连接时3个片段也可以同时连，我同时连过4个片段，关键要控制好各片段的比例。

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2楼2011-08-20 00:53:36

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xingxing8713

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引用回帖:

楼: Originally posted by yguang at 2011-08-20 00:53:36:
做酶切要看你用的哪个公司的酶，根据那个公司酶的说明书来看用什么相应的buffer，酶切体系的组分要看你的DN2A浓度来定。去磷酸化无所谓（这个有些人可能有不同意见，我是自己做了10多年实验的经验，你如果不放心就 ...

为啥要去磷酸化呢

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3楼2011-08-20 10:06:58

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