应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 实验讨论 » 酶切问题求助
91/1返回列表
查看: 1993  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cpugaga

金虫 (小有名气)

[求助] 酶切问题求助

各位大侠，想请教一个问题，还希望大家不吝赐教啊！最近在做双酶切就是分别用BamH1和Not1酶切，以前的时候切两个小时都没事，现在只是切50分钟就老是切得弥散了，把质粒全切散了，一开始怀疑提质粒的问题（乙醇残留，留有杂蛋白什么的），但是重新提取质粒后还是这样 这是什么原因啊？还望大家帮帮我这个无助的孩纸啊...俺已经做了好多次了 每次切了40分钟的时候就胶回收，但是胶回收的效果是一点也不好啊 呵呵
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-30 09:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunye
2楼2011-10-30 09:30:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpugaga

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sunye at 2011-10-30 09:30:01:

谢谢哈 大家支持一下啊
赞一下 回复此楼
3楼2011-10-30 20:43:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

cpugaga(金币+30): 2011-10-31 08:44:58
你可以需要检查一下你的系统是否可能含有DNA酶
最好的办法是所有的东西重新做。但是如果你对这个问题比较清楚，可以这样来做：
1， 用你的酶系统去切你们课题组其它同志的质粒，确定是不是酶系统有问题，包括问问其它人是否遇到相似的问题
2，用单酶切
3，换一个你曾经用过的质粒切
赞一下 回复此楼
致良知
4楼2011-10-30 23:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyinying

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2011-10-31 00:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpugaga

金虫 (小有名气)
★ ★
quiller2000(金币+2): 呵呵，鼓励交流 2011-10-31 08:51:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-10-30 23:20:19:
你可以需要检查一下你的系统是否可能含有DNA酶
最好的办法是所有的东西重新做。但是如果你对这个问题比较清楚，可以这样来做：
1， 用你的酶系统去切你们课题组其它同志的质粒，确定是不是酶系统有问题，包括问 ...

好的 我再试试吧 谢谢了 不过我又提了一下质粒 现在稍微有点改善 但是时间长了 还是有点问题 同一个课题组的 他们是之前切得 效果还好 但是我现在再切就不好了  当然那个酶我用的都是所剩不多的（人家用剩下的）....我怀疑是酶的问题....谢谢了 我再试试
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-10-31 08:44:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpugaga

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wyinying at 2011-10-31 00:31:08:
你说的把质粒全切散了的意思是：你酶切了之后，电泳看结果弥散严重，没有DNA条带吗？
首先要检查你们电泳那一套有没有问题，一般酶切过了也应该是有多的条带出现，如果你的内切酶本身没有问题的话，弥散应该不是 ...

恩  我按照这个方法试过了  现在基本能摸清酶切时间了 我是酶切了40分钟后再检测的 检测的时候很好 但当时等检测完了那个电泳再全部跑电泳时 又有切散得迹象了 呵呵 这会也知道掌握时间了 谢谢了
赞一下 回复此楼
7楼2011-10-31 08:47:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpugaga

金虫 (小有名气)
但是现在又出现一个问题就是 现在我把酶切的胶回收之后 胶回收的条带很浅  请问这样可以做连接吗 就是条带很浅 勉强能看出来 谢谢了
赞一下 回复此楼
8楼2011-10-31 08:50:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunwei57

木虫 (小有名气)
★
wenjing120: 金币+1, 鼓励新虫！欢迎常来科研版！ 2012-03-17 12:16:51
改用Ferment的内切酶或Ferment的快速内切酶酶切1-2小时,一切OK
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-03-17 11:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cpugaga 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +11 xqy2009 2026-10-13 14/700 2026-10-16 10:28 by goodluck7111
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+4 纳斯达克ML 2026-10-11 5/250 2026-10-16 10:03 by shjy2599
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+8 David1982 2026-10-13 12/600 2026-10-16 09:50 by shjy2599
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭