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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 实验讨论 » 酶切问题求助
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cpugaga

金虫 (小有名气)

[求助] 酶切问题求助

各位大侠，想请教一个问题，还希望大家不吝赐教啊！最近在做双酶切就是分别用BamH1和Not1酶切，以前的时候切两个小时都没事，现在只是切50分钟就老是切得弥散了，把质粒全切散了，一开始怀疑提质粒的问题（乙醇残留，留有杂蛋白什么的），但是重新提取质粒后还是这样 这是什么原因啊？还望大家帮帮我这个无助的孩纸啊...俺已经做了好多次了 每次切了40分钟的时候就胶回收，但是胶回收的效果是一点也不好啊 呵呵
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1楼 2011-10-30 09:10:47
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sunye
2楼2011-10-30 09:30:01
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cpugaga

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sunye at 2011-10-30 09:30:01:

谢谢哈 大家支持一下啊
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3楼2011-10-30 20:43:55
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

cpugaga(金币+30): 2011-10-31 08:44:58
你可以需要检查一下你的系统是否可能含有DNA酶
最好的办法是所有的东西重新做。但是如果你对这个问题比较清楚，可以这样来做：
1， 用你的酶系统去切你们课题组其它同志的质粒，确定是不是酶系统有问题，包括问问其它人是否遇到相似的问题
2，用单酶切
3，换一个你曾经用过的质粒切
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致良知
4楼2011-10-30 23:20:19
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wyinying

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2011-10-31 00:31:08
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cpugaga

金虫 (小有名气)
★ ★
quiller2000(金币+2): 呵呵，鼓励交流 2011-10-31 08:51:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-10-30 23:20:19:
你可以需要检查一下你的系统是否可能含有DNA酶
最好的办法是所有的东西重新做。但是如果你对这个问题比较清楚，可以这样来做：
1， 用你的酶系统去切你们课题组其它同志的质粒，确定是不是酶系统有问题，包括问 ...

好的 我再试试吧 谢谢了 不过我又提了一下质粒 现在稍微有点改善 但是时间长了 还是有点问题 同一个课题组的 他们是之前切得 效果还好 但是我现在再切就不好了  当然那个酶我用的都是所剩不多的（人家用剩下的）....我怀疑是酶的问题....谢谢了 我再试试
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6楼2011-10-31 08:44:41
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cpugaga

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wyinying at 2011-10-31 00:31:08:
你说的把质粒全切散了的意思是：你酶切了之后，电泳看结果弥散严重，没有DNA条带吗？
首先要检查你们电泳那一套有没有问题，一般酶切过了也应该是有多的条带出现，如果你的内切酶本身没有问题的话，弥散应该不是 ...

恩  我按照这个方法试过了  现在基本能摸清酶切时间了 我是酶切了40分钟后再检测的 检测的时候很好 但当时等检测完了那个电泳再全部跑电泳时 又有切散得迹象了 呵呵 这会也知道掌握时间了 谢谢了
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7楼2011-10-31 08:47:51
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cpugaga

金虫 (小有名气)
但是现在又出现一个问题就是 现在我把酶切的胶回收之后 胶回收的条带很浅  请问这样可以做连接吗 就是条带很浅 勉强能看出来 谢谢了
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8楼2011-10-31 08:50:22
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sunwei57

木虫 (小有名气)
★
wenjing120: 金币+1, 鼓励新虫！欢迎常来科研版！ 2012-03-17 12:16:51
改用Ferment的内切酶或Ferment的快速内切酶酶切1-2小时,一切OK
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9楼2012-03-17 11:40:02
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