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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切灭活问题 已有5人参与

1、酶切完毕以后,进行电泳,电泳前,需要加热灭活酶吗?为什么?
2、
双酶切的话,是不是要单酶切完毕 以后,灭活,才能进行第二次酶切啊??


谢谢大家
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zhongy1985

木虫 (小有名气)

pidou213(金币+1):谢谢你啊,可是有的时候两个酶不能一起切啊。那是不是要灭活第一个呢? 2010-04-23 00:03
酶切后,电泳前加入的Loading Buffer 就可以终止酶切反应的。
我一直都这样做的,从没加热来灭活酶过。
其实双酶切是可以一起进行的,把两种酶加在一起就反应就可以了。具体情况可以找生物公司,他们有那种表格,里面列出了哪两种酶可以在一起做双酶切的。
LZ加油哦!
2楼2010-04-22 23:32:52
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

重要的不是酶,是buffer
3楼2010-04-23 08:02:48
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j2

木虫 (正式写手)

1:可以直接电泳
2:如不能双酶切,最好在单酶切完纯化后再进行2次酶切
修炼ing,当虫仙……
4楼2010-04-23 10:05:33
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liyong1981

金虫 (正式写手)


重要的不是酶,是buffer  

同意
5楼2010-04-23 13:12:29
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

pidou213(金币+1):谢谢你哦 2010-04-24 00:25
如果双酶切所用酶所需反应温度不一致,先加低温反应的酶切一段时间以后加高温条件下的酶再切,分步进行,不需额外进行失活反应。
6楼2010-04-23 16:06:10
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