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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切灭活问题
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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切灭活问题 已有5人参与

1、酶切完毕以后，进行电泳，电泳前，需要加热灭活酶吗？为什么？
2、
双酶切的话，是不是要单酶切完毕 以后，灭活，才能进行第二次酶切啊？？


谢谢大家
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见得多爱的多
1楼 2010-04-22 23:01:54
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
pidou213(金币+1):谢谢你哦 2010-04-24 00:25
如果双酶切所用酶所需反应温度不一致，先加低温反应的酶切一段时间以后加高温条件下的酶再切，分步进行，不需额外进行失活反应。
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6楼2010-04-23 16:06:10
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zhongy1985

木虫 (小有名气)
pidou213(金币+1):谢谢你啊，可是有的时候两个酶不能一起切啊。那是不是要灭活第一个呢？ 2010-04-23 00:03
酶切后，电泳前加入的Loading Buffer 就可以终止酶切反应的。
我一直都这样做的，从没加热来灭活酶过。
其实双酶切是可以一起进行的，把两种酶加在一起就反应就可以了。具体情况可以找生物公司，他们有那种表格，里面列出了哪两种酶可以在一起做双酶切的。
LZ加油哦！
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2楼2010-04-22 23:32:52
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
重要的不是酶，是buffer
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3楼2010-04-23 08:02:48
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j2

木虫 (正式写手)
1:可以直接电泳
2：如不能双酶切，最好在单酶切完纯化后再进行2次酶切
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2010-04-23 10:05:33
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