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xinmucong123

[交流] 【求助/交流】酶切问题 已有5人参与

我最近做的酶切,先后用了pEGFP-C1,PIRES-ZSGREEN这两个质粒,都是别人鉴定过的,拿过来后摇菌提质粒,酶切总也切不开,双酶切跟单酶切没区别,都是切除单酶切那样的条带,并且是换了不同的酶切,这是哪里出问题了啊?急啊谢谢各位大侠啦
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我本兽医

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
请将实验细节提供的具体一些,谢谢
2楼2010-10-12 22:34:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是双酶切之间的条带很短,琼脂糖电泳没分辨出来啊
3楼2010-10-12 23:12:32
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xinmucong123

引用回帖:
Originally posted by 我本兽医 at 2010-10-12 22:34:07:
请将实验细节提供的具体一些,谢谢

比如,我用sal1切IRES-ZSEGFP,得出4000多的条带,用Xba1和Sac2切,buffer为T+BSA,也只得出4000多的条带,这是怎么回事啊?我的酶没有问题,
4楼2010-10-13 15:50:34
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
切出来的条带应该是多大的啊~
能够分辨开吗?
我们都是芸芸众生的小人物,相遇相知,都是幸福!
5楼2010-10-13 19:45:53
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hutingting

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看看胶的浓度是否合适,如果胶浓度过大,看不出单酶切和双酶切的区别
6楼2010-10-13 22:48:26
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我本兽医

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-14 11:09:44
Xba1和Sac2之间有其他序列么?长度如何?
PS:个人觉得,公用buffer中要求添加BSA的,一般来说,两种酶共用起来效率都不是很高,建议分别单酶切
7楼2010-10-14 09:24:04
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