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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切问题
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xinmucong123

[交流] 【求助/交流】酶切问题 已有5人参与

我最近做的酶切，先后用了pEGFP-C1,PIRES-ZSGREEN这两个质粒，都是别人鉴定过的，拿过来后摇菌提质粒，酶切总也切不开，双酶切跟单酶切没区别，都是切除单酶切那样的条带，并且是换了不同的酶切，这是哪里出问题了啊？急啊谢谢各位大侠啦
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1楼 2010-10-12 21:26:23
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我本兽医

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请将实验细节提供的具体一些，谢谢
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2楼2010-10-12 22:34:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是双酶切之间的条带很短，琼脂糖电泳没分辨出来啊
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3楼2010-10-12 23:12:32
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xinmucong123

引用回帖:
Originally posted by 我本兽医 at 2010-10-12 22:34:07:
请将实验细节提供的具体一些，谢谢

比如，我用sal1切IRES-ZSEGFP,得出4000多的条带，用Xba1和Sac2切，buffer为T+BSA，也只得出4000多的条带，这是怎么回事啊？我的酶没有问题，
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4楼2010-10-13 15:50:34
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
切出来的条带应该是多大的啊~
能够分辨开吗？
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
5楼2010-10-13 19:45:53
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hutingting

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看看胶的浓度是否合适，如果胶浓度过大，看不出单酶切和双酶切的区别
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6楼2010-10-13 22:48:26
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我本兽医

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-14 11:09:44
Xba1和Sac2之间有其他序列么?长度如何？
PS：个人觉得，公用buffer中要求添加BSA的，一般来说，两种酶共用起来效率都不是很高，建议分别单酶切
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7楼2010-10-14 09:24:04
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