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【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题 已有3人参与
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| 请问有人用过SacII和PmlI对pPICZA进行过双酶切吗?我用的是NEB的酶,用SacII和PmlI双酶切质粒pPICZA和PCR产物(1Kb),酶切缓冲液和质粒的量都严格按照说明书进行,并切了12h。然后进行连接转化,提取转化子质粒发现这些转化子都是假阳性,提取出的质粒的大小与载体pPICZA相当,这应该是载体自连导致的。请问是不是用SacII和PmlI很难将pPICZA酶切干净?谢谢 |
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hyw1989960
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呵呵,那怎么可能不回收就去连接呢。载体和PCR产物酶切12h后,利用QIAGENE的试剂盒进行纯化,然后才去连接的。切了那么久还是自连,郁闷啊
请教一下,那我的PCR产物是不是也应该要分步去切呢?