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【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题已有3人参与
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| 请问有人用过SacII和PmlI对pPICZA进行过双酶切吗？我用的是NEB的酶，用SacII和PmlI双酶切质粒pPICZA和PCR产物（1Kb），酶切缓冲液和质粒的量都严格按照说明书进行，并切了12h。然后进行连接转化，提取转化子质粒发现这些转化子都是假阳性，提取出的质粒的大小与载体pPICZA相当，这应该是载体自连导致的。请问是不是用SacII和PmlI很难将pPICZA酶切干净？谢谢 |
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hyw1989960
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2楼2010-05-19 14:37:28
3楼2010-05-19 16:27:17
呵呵，那怎么可能不回收就去连接呢。载体和PCR产物酶切12h后，利用QIAGENE的试剂盒进行纯化，然后才去连接的。切了那么久还是自连，郁闷啊4楼2010-05-19 21:50:50
请教一下，那我的PCR产物是不是也应该要分步去切呢？5楼2010-05-19 21:53:24
6楼2010-05-20 10:16:06