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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒双酶切问题
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疯花血月

金虫 (初入文坛)

[交流] 质粒双酶切问题 已有9人参与

最近从同学那里要了pGEX-KG和pGEX-6p-1的菌液，提取质粒后双酶切鉴定一下，
分别用EcoRI/EcoRV和PstI/EcoRV做了2次双酶切，但是跑胶检测泳道内都是拖带，为什么会这样呢？我只切了1个小时。质粒也跑胶鉴定过了没有问题
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1楼 2011-08-14 10:26:26
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
质粒量太少还是胶有问题？
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jiayoubashaonian
2楼2011-08-14 11:01:58
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疯花血月

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-14 11:01:58:
质粒量太少还是胶有问题？

应该不是质粒量的问题，我切20的体系检测，2次分别加了8和10ul，胶的marker很清楚，也应该不是胶的问题。所以茫然。
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3楼2011-08-14 11:44:15
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 疯花血月 at 2011-08-14 11:44:15:
应该不是质粒量的问题，我切20的体系检测，2次分别加了8和10ul，胶的marker很清楚，也应该不是胶的问题。所以茫然。

期待高手解决楼主这个问题，也没碰到过！
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jiayoubashaonian
4楼2011-08-14 11:47:26
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
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能把图传上来看看吗？
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
5楼2011-08-14 14:02:58
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xulili5283

新虫 (初入文坛)
★ ★
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西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-14 18:29:32
我也出现这样的现象，，，，可能是质粒量少，，浓度太低
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6楼2011-08-14 14:07:01
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persevere

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-14 18:29:39
应该是质粒质量不好，重提一下试试吧
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7楼2011-08-14 14:39:29
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xbl3688

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): good 2011-08-14 18:29:51
这两组酶切位点之间的跨度都很大诶，会不会对酶切效果有影响；另外酶切1小时短了点吧，说明书上有说这么短？？我们用别的酶，一般都要切2-3小时的
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
8楼2011-08-14 16:20:57
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疯花血月

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励回帖交流。 2011-08-18 17:56:34
引用回帖:
4楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-14 11:47:26:
期待高手解决楼主这个问题，也没碰到过！

找到问题了，因为提取质粒的菌液是BL21，后来转了DH5阿尔法酶切就可以了。实验室的人说经常这样，但是原理不详，要是有人知道原理请解释下。谢谢了。
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9楼2011-08-17 20:20:49
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疯花血月

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xbl3688 at 2011-08-14 16:20:57:
这两组酶切位点之间的跨度都很大诶，会不会对酶切效果有影响；另外酶切1小时短了点吧，说明书上有说这么短？？我们用别的酶，一般都要切2-3小时的

找到问题了，因为提取质粒的菌液是BL21，后来转了DH5阿尔法酶切就可以了。实验室的人说经常这样，但是原理不详，要是有人知道原理请解释下。谢谢了。
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10楼2011-08-17 20:21:05
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