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疯花血月

金虫 (初入文坛)

[交流] 质粒双酶切问题 已有9人参与

最近从同学那里要了pGEX-KG和pGEX-6p-1的菌液,提取质粒后双酶切鉴定一下,
分别用EcoRI/EcoRV和PstI/EcoRV做了2次双酶切,但是跑胶检测泳道内都是拖带,为什么会这样呢?我只切了1个小时。质粒也跑胶鉴定过了没有问题
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疯花血月

金虫 (初入文坛)

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励回帖交流。 2011-08-18 17:56:34
引用回帖:
4楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-14 11:47:26:
期待高手解决楼主这个问题,也没碰到过!

找到问题了,因为提取质粒的菌液是BL21,后来转了DH5阿尔法酶切就可以了。实验室的人说经常这样,但是原理不详,要是有人知道原理请解释下。谢谢了。
9楼2011-08-17 20:20:49
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
质粒量太少还是胶有问题?
jiayoubashaonian
2楼2011-08-14 11:01:58
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疯花血月

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-14 11:01:58:
质粒量太少还是胶有问题?

应该不是质粒量的问题,我切20的体系检测,2次分别加了8和10ul,胶的marker很清楚,也应该不是胶的问题。所以茫然。
3楼2011-08-14 11:44:15
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 疯花血月 at 2011-08-14 11:44:15:
应该不是质粒量的问题,我切20的体系检测,2次分别加了8和10ul,胶的marker很清楚,也应该不是胶的问题。所以茫然。

期待高手解决楼主这个问题,也没碰到过!
jiayoubashaonian
4楼2011-08-14 11:47:26
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