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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于酶切的小问题
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380218013

金虫 (小有名气)

[求助] 关于酶切的小问题

小弟想问：够质粒的时候，酶切时间长点可以吗？？比如37度4-5小时的，我可否过夜？多试验有影响吗？？

谢谢！
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好好生活，努力赚钱
1楼 2011-09-05 17:19:10
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lixingliang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-05 18:39:06
没有太大影响，我曾经过夜酶切，但是效果一样的，本人感觉没有必要那么长时间，两小时足够了
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
2楼2011-09-05 17:47:33
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 是的，时间长了会产生非特异酶切 2011-09-05 21:32:03
过夜就没必要吧，一般2-3h就够了。长时间也不好，会降解的。
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3楼2011-09-05 21:25:37
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shuanyu0202

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
380218013(金币+2): 多谢姐姐 2011-09-06 16:40:49
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-09-12 07:24:22
如果没有Star活性的话，过夜也没有问题的，如果有而且没法避免的话最好不要过夜。那样的话会切的很乱，姐姐我是深受其害呀，后面吸取教训了，浪费了整整两管的酶。
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4楼2011-09-06 09:23:11
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莎莎乐happy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励回帖 2011-09-06 16:25:10
单酶切我一般切2.5h，双酶切4h，时间长点儿也没关系，有星号活性的除外。我有一次做试验，SacI单酶切3min，质粒都能被切开。
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5楼2011-09-06 15:23:02
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380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lixingliang at 2011-09-05 17:47:33:
没有太大影响，我曾经过夜酶切，但是效果一样的，本人感觉没有必要那么长时间，两小时足够了

多谢啊
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好好生活，努力赚钱
6楼2011-09-06 16:43:25
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xbl3688

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-12 07:24:40
1、酶切的过程不算很长，一般3-4h，没必要过夜切；
2、一般酶切体系比较小，也就0.5-1ul的酶，枪头粘附或者稍有不准的枪都会使酶的量加大，双酶切我们一般切3个小时，在第二个小时就跑胶看一下，一般也都能切开了，太久了容易切烂。因为酶也不是严格专一的。
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
7楼2011-09-06 19:54:20
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-12 07:24:49
NEB还是TAKARA推荐，除非特别的酶，其它的都可以在5分钟内实现90%的酶切；额们做了实验，证明，他们说的是对的
因此，额们现在都统一切10分钟

不过，请保证质粒质量
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致良知
8楼2011-09-06 23:00:16
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380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-09-06 23:00:16:
NEB还是TAKARA推荐，除非特别的酶，其它的都可以在5分钟内实现90%的酶切；额们做了实验，证明，他们说的是对的
因此，额们现在都统一切10分钟

不过，请保证质粒质量

NEB 的 质粒的质量有什么量化的标准吗？？比如一般质粒浓度是多少，A260/A280 是多少时候，就可以切10分钟了？？？
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9楼2011-09-11 20:36:53
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xiaoche

铜虫 (小有名气)
偶大部分时间都是过夜切，这样省事。呵呵，一般也没有问题，除非有的酶很容易出现星活性。
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10楼2011-09-16 17:07:16
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