应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于酶切的问题
101/1返回列表
查看: 1644  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于酶切的问题

在各种酶的说明书中，酶切体系中都有DNA≤1μg，DNA的量应该怎么把握，比如50μl的体系，我要加多少DNA，对于小片段和质粒有没有区别？
        谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-30 19:34:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuibingyue

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-31 00:12:47
看你做酶切的用途吧，酶切验证的话10ul体系切个300ng，0.3ul的酶半个小时就差不多了。构载体的话一般是三四十的体系，质粒切六七百纳克，PCR片段把胶回收后的都切了就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-10-30 20:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiminhb

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shuibingyue at 2010-10-30 20:26:20:
看你做酶切的用途吧，酶切验证的话10ul体系切个300ng，0.3ul的酶半个小时就差不多了。构载体的话一般是三四十的体系，质粒切六七百纳克，PCR片段把胶回收后的都切了就可以了。

具体操作要怎么做啊，我想知道要加多少体积的DNA
赞一下 回复此楼
3楼2010-10-30 20:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smilerion

银虫 (初入文坛)
可以定量的啊，不同的抽提方法浓度不一样
赞一下 回复此楼
4楼2010-10-30 21:37:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-10-30 20:41:56:



具体操作要怎么做啊，我想知道要加多少体积的DNA

DNA的浓度不一样，不好说体积吧
赞一下 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
5楼2010-10-31 10:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
一般都有要求的哈
赞一下 回复此楼
6楼2010-10-31 10:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 11:07:31
要看你做什么用途的。如果是用做杂交用的话，大概就是要用大于5ug-10ug的。体系大约就是在400ul左右，酶量用20U左右足够。酶切16个小时。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-10-31 10:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luodan001

禁虫 (初入文坛)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 16:03:40
本帖内容被屏蔽
8楼2010-10-31 14:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuibingyue

新虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 16:03:55
weiminhb(金币+2): 2010-11-01 10:24:54
构载体做酶切的话你的目的片段一般是PCR得来的，做了PCR要跑胶，回收目的片段，我们一般是30ul的TE洗脱。酶切的时候一般做30-40ul的体系，把回收到的DNA都加进去，内切酶加1ul，切三个小时，体积不够的话可以补水。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-10-31 14:54:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fzfangtao

木虫 (正式写手)
你个浓度都没有，我们怎么说体积？
赞一下 回复此楼
10楼2010-10-31 15:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weiminhb 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭