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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于酶切的问题
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于酶切的问题

在各种酶的说明书中，酶切体系中都有DNA≤1μg，DNA的量应该怎么把握，比如50μl的体系，我要加多少DNA，对于小片段和质粒有没有区别？
        谢谢！
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1楼 2010-10-30 19:34:33
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shuibingyue

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-31 00:12:47
看你做酶切的用途吧，酶切验证的话10ul体系切个300ng，0.3ul的酶半个小时就差不多了。构载体的话一般是三四十的体系，质粒切六七百纳克，PCR片段把胶回收后的都切了就可以了。
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2楼2010-10-30 20:26:20
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weiminhb

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shuibingyue at 2010-10-30 20:26:20:
看你做酶切的用途吧，酶切验证的话10ul体系切个300ng，0.3ul的酶半个小时就差不多了。构载体的话一般是三四十的体系，质粒切六七百纳克，PCR片段把胶回收后的都切了就可以了。

具体操作要怎么做啊，我想知道要加多少体积的DNA
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3楼2010-10-30 20:41:56
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smilerion

银虫 (初入文坛)
可以定量的啊，不同的抽提方法浓度不一样
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4楼2010-10-30 21:37:42
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j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-10-30 20:41:56:



具体操作要怎么做啊，我想知道要加多少体积的DNA

DNA的浓度不一样，不好说体积吧
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
5楼2010-10-31 10:00:25
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wangy0908

金虫 (正式写手)
一般都有要求的哈
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6楼2010-10-31 10:53:41
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wangy0908

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 11:07:31
要看你做什么用途的。如果是用做杂交用的话，大概就是要用大于5ug-10ug的。体系大约就是在400ul左右，酶量用20U左右足够。酶切16个小时。
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7楼2010-10-31 10:55:44
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luodan001

禁虫 (初入文坛)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 16:03:40
本帖内容被屏蔽
8楼2010-10-31 14:19:54
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shuibingyue

新虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 16:03:55
weiminhb(金币+2): 2010-11-01 10:24:54
构载体做酶切的话你的目的片段一般是PCR得来的，做了PCR要跑胶，回收目的片段，我们一般是30ul的TE洗脱。酶切的时候一般做30-40ul的体系，把回收到的DNA都加进去，内切酶加1ul，切三个小时，体积不够的话可以补水。
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9楼2010-10-31 14:54:51
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fzfangtao

木虫 (正式写手)
你个浓度都没有，我们怎么说体积？
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10楼2010-10-31 15:30:20
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