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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于酶切的问题

在各种酶的说明书中,酶切体系中都有DNA≤1μg,DNA的量应该怎么把握,比如50μl的体系,我要加多少DNA,对于小片段和质粒有没有区别?
        谢谢!
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shuibingyue

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-10-31 00:12:47
看你做酶切的用途吧,酶切验证的话10ul体系切个300ng,0.3ul的酶半个小时就差不多了。构载体的话一般是三四十的体系,质粒切六七百纳克,PCR片段把胶回收后的都切了就可以了。
2楼2010-10-30 20:26:20
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by shuibingyue at 2010-10-30 20:26:20:
看你做酶切的用途吧,酶切验证的话10ul体系切个300ng,0.3ul的酶半个小时就差不多了。构载体的话一般是三四十的体系,质粒切六七百纳克,PCR片段把胶回收后的都切了就可以了。

具体操作要怎么做啊,我想知道要加多少体积的DNA
3楼2010-10-30 20:41:56
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smilerion

银虫 (初入文坛)

可以定量的啊,不同的抽提方法浓度不一样
4楼2010-10-30 21:37:42
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j2

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-10-30 20:41:56:



具体操作要怎么做啊,我想知道要加多少体积的DNA

DNA的浓度不一样,不好说体积吧
修炼ing,当虫仙……
5楼2010-10-31 10:00:25
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wangy0908

金虫 (正式写手)

一般都有要求的哈
6楼2010-10-31 10:53:41
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wangy0908

金虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 11:07:31
要看你做什么用途的。如果是用做杂交用的话,大概就是要用大于5ug-10ug的。体系大约就是在400ul左右,酶量用20U左右足够。酶切16个小时。
7楼2010-10-31 10:55:44
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luodan001

禁虫 (初入文坛)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 16:03:40
本帖内容被屏蔽

8楼2010-10-31 14:19:54
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shuibingyue

新虫 (小有名气)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 16:03:55
weiminhb(金币+2): 2010-11-01 10:24:54
构载体做酶切的话你的目的片段一般是PCR得来的,做了PCR要跑胶,回收目的片段,我们一般是30ul的TE洗脱。酶切的时候一般做30-40ul的体系,把回收到的DNA都加进去,内切酶加1ul,切三个小时,体积不够的话可以补水。
9楼2010-10-31 14:54:51
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fzfangtao

木虫 (正式写手)

你个浓度都没有,我们怎么说体积?
10楼2010-10-31 15:30:20
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