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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切的问题哦
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匿名

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1楼 2009-12-31 21:08:02
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j2

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的质粒本来跑出来时什么样子的？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2010-01-02 10:00:22
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匿名

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3楼2010-01-02 10:17:43
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xiangao

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
好切的酶切的时间应该短一些
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4楼2010-01-02 12:43:46
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也出现过同样的问题，我的是将目的基因连接到T载体上，用的也是这两个酶切位点，测序结果显示连接完全没问题，但是就是酶切不对劲。切出来的带没有我的目的条带，我的目的带是700bp，但是切出来的一大堆的带，1000多的就好几条，还有2000多的。我百思不得其解，如果你的问题已经解决，麻烦分享一下经验。感激不尽！
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5楼2010-01-02 22:40:51
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nnsulei

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我的天啊  我也用这两个酶做酶切 怎么都切不出来  ～急啊
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努力做就有结果～
6楼2010-08-02 16:10:11
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xmasylm

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-08-03 05:51:25
看天(金币+4):新人鼓励交流 2010-08-05 11:34:17
你切的连接转化后的质粒吗？那样的话可能是因为酶切时间太长发生降解了。一般我作双酶切鉴定的时候只切2-2.5h就能看见小片段。
另外我曾经看过一个帖子提到过，NEB的酶用起来很少有降解
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7楼2010-08-02 23:35:56
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看来不只我一个人遇到了这种问题啊
正急着解决啊
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8楼2010-08-03 12:05:48
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195251071

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
看天(金币+5):新人鼓励 常来 2010-08-05 11:34:32
重新提质粒，跑一个没有切得质粒作为阴性对照，如果还有弥散的带，检查你的质粒上的序列是不是有其他位置的BamHI/XbaI酶切序列使得序列被切散了。
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9楼2010-08-05 10:48:50
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该是酶切的时间太长了，3小时足矣
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10楼2010-08-06 00:18:00
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