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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切的问题哦
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willer

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by 195251071 at 2010-08-05 10:48:50:
重新提质粒，跑一个没有切得质粒作为阴性对照，如果还有弥散的带，检查你的质粒上的序列是不是有其他位置的BamHI/XbaI酶切序列使得序列被切散了。

正解！

你可以用neb网站的 nebcutter 预测你酶切的结果
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11楼2010-08-06 02:41:23
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★ ★
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lstt09nk(金币+1):是的~ 2010-08-07 09:41:37
时间应该短一些，在3~5小时，酶切体系也应该摸索一下（适合自己实验室的），酶量不能超过总体积的1/10.
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梦在路就在！
12楼2010-08-06 05:17:33
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周_yan

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我认为应该是酶切的时间过长了，应适当缩短酶切时间。
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13楼2010-08-06 08:52:04
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2):感谢回复，希望对楼主有所帮助~ 2010-08-07 09:41:20
有可能是以下几种原因吧
1、电泳的缓冲液不好了，需要更换新的缓冲液。电压太高了，使电泳的温度太高。
2、酶是否有污染了，双酶切的Buffer是否正确
3、酶是不是没从DNA片段上解离开，如果前两种都确定没有那就可以加入SDS帮助解离，看是不是有改善。
可能还有别的原因吧，我想到的就是这些了。
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14楼2010-08-06 14:39:02
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amilie030312

金虫 (正式写手)
正常的酶切时间是1小时，有些快速的是几分钟，时间长了并不一定是好事。
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15楼2010-08-06 14:39:42
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ronghuan

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做过酶切试验，没出现过类似的情况。应该是酶切时间太长，把质粒切烂了
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16楼2010-08-06 15:06:10
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蒲公英6857

银虫 (初入文坛)

我们现在也在探讨这个问题

★
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大家多给点意见啊。。。
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17楼2010-08-06 15:06:17
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stliimoon

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切时间太长了，还有可能就是你的质粒上有其他的BamHI/XbaI酶切序列！
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18楼2010-08-06 15:43:57
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Jay_Joy

铜虫 (小有名气)
★
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我现在就很头疼这个问题，BamHI验证过酶切没任何问题，就是XbaI酶切就是切不下来。
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19楼2011-03-11 22:20:07
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