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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】ECORI酶切反应体系体积可加大吗已有1人参与

我想用限制性内切酶EcoRI酶切从金黄色葡萄球菌中提取的总DNA大约100微升,不知道是否可将EcoRI酶切反应体系加大到相应倍数,体系中所加试剂是否可加大到相应倍数 ?
这样的话,EcoRI酶切反应条件好控制吗?不会切不出来吧?

[ Last edited by lilirong2009 on 2010-10-9 at 10:08 ]
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gbrillia

银虫 (小有名气)

★ ★
lilirong2009(金币+2):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-10-09 10:36:40
可以按照倍数加大酶的用量,例如10微升体系一般加入0.5微升的酶,100微升体系就加入5微升酶,体系中的buffer也加倍。
但是我觉得用大体系做酶切的效果不如小体系的好,你可以分成两个50微升的做
2楼2010-10-09 10:02:04
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feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶

★ ★ ★
lilirong2009(金币+2):谢谢参与
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-10-09 23:30:32
不是菌液直接酶切吧如果是质粒的话,可以直接扩大倍数,但是怎么也用不了那么大的体积啊。做连接,鉴定什么的都用20就够了
会不会偶尔也会想起我....
3楼2010-10-09 10:05:06
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walker2898

银虫 (小有名气)

★ ★
lilirong2009(金币+2):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-10-09 23:30:36
我觉得一楼说的比较好,你可以分成小体积酶切,然后再混到一起就可以了,可以考虑适当延长酶切时间。
4楼2010-10-09 10:37:04
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)


lilirong2009(金币+2):谢谢参与
加大倒是没问题,不过使用EcoRI是一定要注意酶切条件(包括buffer、酶切温度等等)很可能导致星号活性反应
5楼2010-10-09 20:20:18
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virus2009

金虫 (正式写手)

人称 龙哥


lilirong2009(金币+2):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by gbrillia at 2010-10-09 10:02:04:
可以按照倍数加大酶的用量,例如10微升体系一般加入0.5微升的酶,100微升体系就加入5微升酶,体系中的buffer也加倍。
但是我觉得用大体系做酶切的效果不如小体系的好,你可以分成两个50微升的做

看你用什么样的酶了?你100ul体系用酶加5u,够我切500ul了,LZ可以根据你提取的量和酶活单位加酶,体系可相应的扩大。l
virus
6楼2010-10-09 21:01:05
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怎么都行

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以按比例增加用量,但我觉得像一楼说的那样更好些
7楼2010-10-09 21:05:06
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