应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何导将ApaI酶切位点变成EcoRI
91/1返回列表
查看: 2584  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

decloud

木虫 (著名写手)

[求助] 如何导将ApaI酶切位点变成EcoRI

我有一段序列在3‘端的酶切位点是ApaI， 我想把这个酶位点覆盖变成EcoRI，
有没有高手指点啊，别人跟我说可以在这个位点后面导入新的位点，但是ApaI会影响我将来的实验，我不想保留这个ApaI，
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
适则存乙，劳则忙乙，
1楼 2012-03-18 15:36:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！ 2012-03-19 11:47:46
decloud: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 可不可以直接设计新的引物,然后pcr来取代ApaI为点. 2012-03-19 12:12:02
举个例子。GGGCCC酶切位点
切完后为5‘G
             3'CCCGG

你的接头应该为
        5‘GGCCC  +EcoRI
                     3'G
这样互补后就是apa1位点+ecorI位点

如果你修改为
        5‘GGCCA +EcoRI
                     3'T
这样ApaI就消失了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-03-19 11:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

taxuan

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜: 金币+3, 新虫特别奖励~欢迎常来！ 2012-03-19 11:47:13
可以这样，先将基因上的这个酶切位点切掉，再设计一个带EcoRI的接头与之连接就好了！
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-18 21:06:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taxuan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以这样，先将基因上的这个酶切位点切掉，再设计一个带EcoRI的接头与之连接就好了！
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-18 21:07:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励 2012-03-19 10:04:59
楼主，这个很简单，是否保留看你决定，因为是粘端酶切位点，当用apal切的时候会产生5突的粘端，用带ecor1的接头连接，但是互补接头用compatible end，不要用apa1的反向重复序列。这样apa就消失了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-03-18 22:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

decloud

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shaquila at 2012-03-18 02:32:43:
楼主，这个很简单，是否保留看你决定，因为是粘端酶切位点，当用apal切的时候会产生5突的粘端，用带ecor1的接头连接，但是互补接头用compatible end，不要用apa1的反向重复序列。这样apa就消失了。

但是这个compatible end 需要怎么设计呢。我是第一做这个，谢谢
赞一下 回复此楼
适则存乙，劳则忙乙，
5楼2012-03-19 07:18:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
如果直接用pcr可以的，但是如果是载体就，片段太大，效率不高。
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-19 18:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

decloud

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by shaquila at 2012-03-18 22:38:34:
如果直接用pcr可以的，但是如果是载体就，片段太大，效率不高。

PCR也就500多bp吧,
如果直接涉及comtabile end的引物, 好像还涉及到一个5' end的磷酸化,貌似磷酸化了以后才可以ligation.

这个5' end 磷酸化要怎么弄呢...再次谢谢
赞一下 回复此楼
适则存乙，劳则忙乙，
8楼2012-03-20 03:21:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by decloud at 2012-03-20 03:21:56:
PCR也就500多bp吧,
如果直接涉及comtabile end的引物, 好像还涉及到一个5' end的磷酸化,貌似磷酸化了以后才可以ligation.

这个5' end 磷酸化要怎么弄呢...再次谢谢

如果接头有20来个bp以上的话，不磷酸化也是没有问题的，只要保证有部分质粒连接后没有线性化，就可以转化细菌。
赞一下 回复此楼
9楼2012-03-20 10:48:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 decloud 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +5 archer.. 2026-04-09 7/350 2026-04-09 22:18 by lbsjt
[考研] 080100力学316求调剂 +4 L_Hairui 2026-04-07 4/200 2026-04-09 21:17 by wutongshun
[考研] 312求调剂 +3 李鸿飞飞 2026-04-06 3/150 2026-04-09 17:32 by wp06
[考研] 22408 270分 +9 sanjin020722 2026-04-08 10/500 2026-04-09 14:11 by 诗与自由
[考研] 一志愿华南师范大学0702物理学305调剂 +4 念常安 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:53 by bljnqdcc
[考博] 材料方向考博，求推荐 +3 言语aaa 2026-04-05 4/200 2026-04-08 22:22 by nxgogo
[考研] 机械工程313分找工科调剂 +3 双一流本科机械 2026-04-08 3/150 2026-04-08 20:41 by 土木硕士招生
[考研] 化工学硕 285求调剂 +26 Wisjxn 2026-04-07 26/1300 2026-04-08 14:42 by screening
[考研] 336求调剂，一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 调剂 +3 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:39 by 电气300求调剂不
[考研] 306求调剂 +3 15287505595 2026-04-03 3/150 2026-04-07 18:08 by 蓝云思雨
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-05 5/250 2026-04-06 15:40 by lin-da
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 求调剂 +5 wos666 2026-04-03 5/250 2026-04-06 10:13 by 蓝云思雨
[考研] 332求调剂 +17 小小孟... 2026-04-05 18/900 2026-04-06 09:51 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 295求调剂 +8 FZAC123 2026-04-03 8/400 2026-04-05 17:46 by 蓝云思雨
[考研] 306分材料与化工求调剂 +7 黎吧啦啦你很有� 2026-04-03 7/350 2026-04-05 17:18 by Hdyxbekcb
[考研] 278求调剂 +6 Yy7400 2026-04-03 6/300 2026-04-04 09:53 by zhangdingwa
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭