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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】EcoR V 和ApaI 酶切位点的保护基团
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380218013

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】EcoR V 和ApaI 酶切位点的保护基团 已有5人参与

小弟在做PCR。但是，EcoR V 和ApaI  酶切位点的保护基团却怎么也找不到。查到的汇总上都没有。请高人指点。。急！！
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好好生活，努力赚钱
1楼 2011-02-22 13:17:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-22 16:27:40

http://www.fermentas.com/cn/supp ... cleavage-efficiency

如果没有，加5~6个碱基就足够了
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2楼2011-02-22 13:21:57
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-02-23 09:41:09

找不到的话就自己加吧，呵呵。加G或者C，加3个一般都够用了。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2011-02-22 13:30:31
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380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-22 05:21:57:
http://www.fermentas.com/cn/supp ... cleavage-efficiency

如果没有，加5~6个碱基就足够了

没有。可以自己加吗？几种碱基随便加吗？
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好好生活，努力赚钱
4楼2011-02-22 13:34:41
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380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-22 05:30:31:
找不到的话就自己加吧，呵呵。加G或者C，加3个一般都够用了。

这样可以吗？还真是找不到。
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好好生活，努力赚钱
5楼2011-02-22 13:36:00
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
引用回帖:
Originally posted by 380218013 at 2011-02-22 05:36:00:
这样可以吗？还真是找不到。

呵呵 of cource
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2011-02-22 13:41:00
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cxt86

金虫 (小有名气)
★
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我一般也是随便加的，3个以上就可以，但是最好过夜酶切，酶切时间短的话酶切效率太低
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7楼2011-02-22 13:57:23
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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dhd997(金币+3): good 2011-02-23 09:41:21

随便加
不需要过夜酶切
按照酶活定义算时间
然后在这个基础上延长10%左右的时间就足够了
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8楼2011-02-22 15:21:55
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woshishao

金虫 (初入文坛)
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dhd997(金币+3): good 2011-02-23 09:41:28

http://baike.baidu.com/view/2223436.html?fromTaglist
参考这个，保护性碱基只用看看个数就行了，是哪个碱基就自己选，个人偏好使用GC多的，不过也不要设成连A连T那种就好了。我就是这么设置的，超过100多个质粒的构建实验，没有发现酶切位点突变问题。
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9楼2011-02-22 22:18:08
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