应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何导将ApaI酶切位点变成EcoRI
41/1返回列表
查看: 2401  |  回复: 8
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

decloud

木虫 (著名写手)

[求助] 如何导将ApaI酶切位点变成EcoRI

我有一段序列在3‘端的酶切位点是ApaI， 我想把这个酶位点覆盖变成EcoRI，
有没有高手指点啊，别人跟我说可以在这个位点后面导入新的位点，但是ApaI会影响我将来的实验，我不想保留这个ApaI，
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
适则存乙，劳则忙乙，
1楼 2012-03-18 15:36:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励 2012-03-19 10:04:59
楼主，这个很简单，是否保留看你决定，因为是粘端酶切位点，当用apal切的时候会产生5突的粘端，用带ecor1的接头连接，但是互补接头用compatible end，不要用apa1的反向重复序列。这样apa就消失了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-03-18 22:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！ 2012-03-19 11:47:46
decloud: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 可不可以直接设计新的引物,然后pcr来取代ApaI为点. 2012-03-19 12:12:02
举个例子。GGGCCC酶切位点
切完后为5‘G
             3'CCCGG

你的接头应该为
        5‘GGCCC  +EcoRI
                     3'G
这样互补后就是apa1位点+ecorI位点

如果你修改为
        5‘GGCCA +EcoRI
                     3'T
这样ApaI就消失了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-03-19 11:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
如果直接用pcr可以的，但是如果是载体就，片段太大，效率不高。
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-19 18:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 decloud 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭