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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】ECORI酶切反应体系体积可加大吗
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】ECORI酶切反应体系体积可加大吗 已有1人参与

我想用限制性内切酶EcoRI酶切从金黄色葡萄球菌中提取的总DNA大约100微升，不知道是否可将EcoRI酶切反应体系加大到相应倍数，体系中所加试剂是否可加大到相应倍数 ？
这样的话，EcoRI酶切反应条件好控制吗？不会切不出来吧？

[ Last edited by lilirong2009 on 2010-10-9 at 10:08 ]
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1楼 2010-10-09 09:54:32
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gbrillia

银虫 (小有名气)
★ ★
lilirong2009(金币+2):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-10-09 10:36:40
可以按照倍数加大酶的用量，例如10微升体系一般加入0.5微升的酶，100微升体系就加入5微升酶，体系中的buffer也加倍。
但是我觉得用大体系做酶切的效果不如小体系的好，你可以分成两个50微升的做
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2楼2010-10-09 10:02:04
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feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶
★ ★ ★
lilirong2009(金币+2):谢谢参与
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-09 23:30:32
不是菌液直接酶切吧如果是质粒的话，可以直接扩大倍数，但是怎么也用不了那么大的体积啊。做连接，鉴定什么的都用20就够了
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会不会偶尔也会想起我....
3楼2010-10-09 10:05:06
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walker2898

银虫 (小有名气)
★ ★
lilirong2009(金币+2):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-09 23:30:36
我觉得一楼说的比较好，你可以分成小体积酶切，然后再混到一起就可以了，可以考虑适当延长酶切时间。
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4楼2010-10-09 10:37:04
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★
lilirong2009(金币+2):谢谢参与
加大倒是没问题，不过使用EcoRI是一定要注意酶切条件（包括buffer、酶切温度等等）很可能导致星号活性反应
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5楼2010-10-09 20:20:18
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virus2009

金虫 (正式写手)

人称 龙哥
★
lilirong2009(金币+2):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by gbrillia at 2010-10-09 10:02:04:
可以按照倍数加大酶的用量，例如10微升体系一般加入0.5微升的酶，100微升体系就加入5微升酶，体系中的buffer也加倍。
但是我觉得用大体系做酶切的效果不如小体系的好，你可以分成两个50微升的做

看你用什么样的酶了？你100ul体系用酶加5u，够我切500ul了，LZ可以根据你提取的量和酶活单位加酶，体系可相应的扩大。l
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virus
6楼2010-10-09 21:01:05
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怎么都行

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以按比例增加用量，但我觉得像一楼说的那样更好些
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7楼2010-10-09 21:05:06
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