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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助！请问 NdeI 和EcoRI 同时做酶切可以吗？
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worm2010

金虫 (小有名气)

[求助] 求助！请问 NdeI 和EcoRI 同时做酶切可以吗？

用的是宝生物的这两种酶

但是目录上没有查到关于二者同时酶切的详细资料

求助有经验的兄弟姐妹们，这两种酶可以同时切吗？切几个小时

比较好呢?

一般双酶切DNA什么条件比较合适？（时间上）

平末端的连接条件是指什么？4度过夜？
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1楼 2011-06-05 12:25:14
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jia1012428

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

worm2010(金币+2): 2011-06-05 18:41:47
网上有很多关于双酶切共用的反应缓冲液的表，你查一下，可以发现两个酶的通用缓冲液是1xH buffer，再看一下两个酶的说明书，发现这两个酶在1xH buffer下的酶切效率都是100%，那么就把两个酶的酶切体系里的物质加到一起就行了，剩下的用水补到20微升，你也可以根据需要等比例放大。
反应时间2小时够了，如果觉得不放心可以加长时间，但不要超过4小时，长时间会造成错误切割。
酶切之后都是粘性末端，用solution 1连接，16度过夜。
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2楼2011-06-05 17:56:00
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jia1012428 at 2011-06-05 17:56:00:
网上有很多关于双酶切共用的反应缓冲液的表，你查一下，可以发现两个酶的通用缓冲液是1xH buffer，再看一下两个酶的说明书，发现这两个酶在1xH buffer下的酶切效率都是100%，那么就把两个酶的酶切体系里的物质加到 ...

说的很详细，非常感谢！
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3楼2011-06-05 18:42:08
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jia1012428 at 2011-06-05 17:56:00:
网上有很多关于双酶切共用的反应缓冲液的表，你查一下，可以发现两个酶的通用缓冲液是1xH buffer，再看一下两个酶的说明书，发现这两个酶在1xH buffer下的酶切效率都是100%，那么就把两个酶的酶切体系里的物质加到 ...

那 请问，酶切后的目的片段与质粒用T4DNA 连接酶4度过夜可以吗？
NdeI的说明书上说要用平滑末端的连接条件，因为它所切出的粘末端连接效率较低，所以我不太明白他上面说的平末端连接条件是什么，请问您知道吗？
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4楼2011-06-05 18:45:43
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